Методом по биуретовой реакции

Реактивы и оборудование:набор реактивов для определения общего белка фирмы Ольвекс, спектрофотометр (ФЭК), пробирки, пипетки.

Опыт 1. В трех пронумерованных пробирках подготовьте пробы следующего состава:

Пробы тщательно перемешайте и инкубируйте при комнатной температуре в течение 30 минут или в 15 минут при 37⁰С. Измерьте оптическую плотность опытной и калибровочной проб против контрольной пробы при λ=540 нм.

Расчет концетрации белка произвести по формуле:

 где

Где, С – концентрация белка, г/л

Е_пробы – оптическая плотность опытной пробы;

Е_{калибратора} – оптическая плотность калибровочной пробы;

70 – концентрация белка в калибровочной пробе, г/л

Произвести расчет концентрации белка в сыворотке крови, сравнить с нормативными значениями (табл. в приложении) и сделать вывод.

Лабораторная работа № 7

Кислотный гидролиз нуклеопротеида

Лабораторная работа № 12

В колбу Кьельдаля внести 30мл раствора нуклеопротеида, полученного из дрожжей, и добавить 30мл 10% H₂SO₄. Колбу закрыть пробкой с обратным холодильником и осторожно кипятить в течение часа. После этого содержимое колбы охладить и профильтровать.

Небольшую часть полученного гидролизата (фильтрата) отлить в пробирку и использовать для определения фосфорной кислоты.

Оставшийсягидролизат нейтрализовать щелочью и использовать для обнаружения белков, пентоз, азотистых оснований.

1. Обнаружение фосфорной кислоты.

В пробирку внести 0,5-1 мл кислого гидролизата, добавить 0,5-1мл реактива на фосфор (ванадат-молибденовый реактив). Появление желтого окрашивания свидетельствует о наличии фосфорной кислоты.

2. Обнаружение пентоз.

В пробирку внести 0,5-1мл нейтрализованногогидролизата, добавить равный объемреактиваФелинга. Содержимое пробирки перемешать и нагреть до кипения верхний слой жидкости. Появление красно-желтого окрашивания свидетельствует о наличии пентоз.

3. Обнаружение пуриновых оснований.

В пробирку внести 0,5-1 мл нейтрализованного гидролизата и добавить равный объем аммиачного раствора серебра. Появление хлопьевидного осадка свидетельствует о наличии аденина и гуанина.

4. Обнаружение протеинов.

В пробирку 0,5-1мл нейтрализованногогидролизата, добавить равный объем 10% NaOH и 1-2капли 1% СuSO₄. Появление сине-фиолетового окрашивания свидетельствует о наличии белков.

Провести визуальные наблюдения и сделать вывод. Написать уравнение ступенчатого гидролиза нуклеопротеида, указать ферменты.

Лабораторная работа № 8

Качественные реакции на витамины

Реактивы и оборудование: Витамины: ретинол, эргокальциферол, токоферол, тиамин, рибофлавин, аскорбиновая кислота; ледяная уксусная кислота, насыщенная сульфатом железа (II), концентрированная серная, соляная и азотная кислоты, раствор анилина в  концентрированной соляной кислоте, бром в хлороформе (1:60), раствор хлорида железа (ΙΙΙ), раствор красной кровяной соли, изобутиловый спирт, раствор сульфаниловой кислоты, 5% раствор нитрита натрия, 10% раствор карбоната натрия, металлический цинк, раствор метиленовой сини, 10% раствор соляной кислоты, штативы, пробирки, водяная баня, спиртовки, держатели для пробирок, флюороскоп.

Ретинол - витамин А

Этот витамин относится к жирорастворимым витаминам и состоит из нескольких витамеров. Все витамеры являются производными каротинов и образуются только в организме животных

Опыт 1. Реакция с серной кислотой

На предметное стекло нанести 1-2 капли масляного раствора витамина А и добавить 1-2 капли конц. H₂SO₄. Появление сине-фиолетового окрашивания свидетельствует о наличии витамина А.

Опыт 2. Реакция Друммонда

2-3 капли раствора витамина А помещают в пробирку, быстро добавляют 1 мл хлороформа и 0,5 мл концентрированной серной кислоты. Появляется красно-фиолетовое окрашивание, переходящее в красно-бурое.

Опыт 3. Реакция с сульфатом железа (ΙΙ)

2-3 капли раствора витамина А помещают в сухую пробирку, добавляют 1 мл ледяной уксусной кислоты, насыщенной сульфатом железа (ΙΙ), и несколько капель концентрированной серной кислоты. Появляется голубое окрашивание, быстро переходящее в красное.

Провести визуальные наблюдения, сделать вывод. Написать формулу витамина А. Указать содержание витамина в сыворотке крови с.-х. животных и его биохимическую роль.

Кальциферол - витамин Д

Витамин Д относится к стероидам и является производным циклопентанопергидрофаенантрена. Витамины группы Д существуют в виде нескольких витамеров. Наиболее распространенными являются витамин Д₂–эргокальциферол и витамин Д₃ – холекальциферол.

Опыт 4. Бромхлороформная проба

В сухую пробирку вносят 2-3 капли витамина Д и 1 мл раствора брома в хлороформе (1:60). В присутствии витамина Д постепенно появляется зеленовато-голубое окрашивание.

Опыт 5. Реакция с анилином

В сухую пробирку вносят 2-3 капли витамина Д, 1 мл хлороформа, а затем осторожно при помешивании 0,5 мл анилинового реактива. Осторожно кипятят. При наличии витамина Д желтая эмульсия приобретает сначала зеленый, а затем красный цвет.

Провести визуальные наблюдения, сделать вывод. Написать формулу витамина Д. Указать содержание витамина в сыворотке крови с.-х. животных и его биохимическую роль.

Токоферол - витамин Е

Витамин Е представлен несколькими витамерами, получившими название α -, β – и γ - токоферолов. Он устойчив к нагреванию и действию кислот, разрушается под действием ультрафиолетовых лучей.