Реакция с нитропруссидом натрия

Эта реакция также позволяет определить наличие в белке цистеина, образующего в сильнощелочной среде при кипячении ион серы. Раствор белка, содержащего цистеин, дает с нитропруссидом натрия красно-фиолетовое окрашивание. Интенсивность окрашивания зависит от количества аминокислот, содержащих серу, и от количества белка в растворе.

Опыт 8. К 2 мл 1% раствора яичного белка добавляют 2 мл 20% раствора щелочи, кипятят, а после охлаждения приливают 1 мл свежеприготовленного 5% раствора нитропруссида натрия, после чего появляется красно-фиолетовое окрашивание.

Реакция Сакагучи

Эта реакция позволяет обнаруживать в белке аминокислоту аргинин. При взаимодействии аргинина с гипобромитом в щелочной среде в присутствии α-нафтола гуанидиновая группировка аргинина окисляется гипобромитом и образуется продукт конденсации розово-красного цвета.

Образующийсянафтиларгинин может далее окисляться гипобромитом натрия с образованием соединения типа хинонимина. Не исключена, однако, вероятность образования еще более сложного соединения за счет дальнейшего окисления оставшихся NH-групп гуанидинового остатка и бензольного ядра α-нафтола.

Опыт 9. Опыт проделывают с яичным белком и со свободным аргинином. В первую пробирку добавляют 2 мл 0,01% раствора аргинина, во вторую – 2 мл раствора яичного белка. В обе пробирки добавляют по 2 мл 10% раствора гидроксида натрия и по 2-3 капли 0,2% спиртового раствора α-нафтола, хорошо перемешивают и приливают в каждую пробирку по 2 мл гипобромита натрия. Для стабилизации быстроразвивающегося розово-красного окрашивания можно добавить 1 мл 40% раствора мочевины.

Реакция на триптофан

Триптофан, реагируя в кислой среде с альдегидами, образует окрашенные продукты конденсации. Например, с глиоксиловой кислотой (являющейся примесью к концентрированной уксусной кислоте) реакция протекает по уравнению:

По аналогичной схеме протекает и реакция триптофана с формальдегидом.

Опыт 10. В пробирку наливают 2 мл 0,005% раствора триптофана, добавляют равный объем раствора глиоксиловой кислоты и 1 мл 0,04 М раствора сульфата меди. Осторожно по каплям прибавляют 2 – 3 мл конц. серной кислоты при охлаждении пробирки под струей водопроводной воды или во льду. Оставляют на 10 мин при комнатной температуре и ставят на 5 мин в кипящую водяную баню. Развивается сине-фиолетовое окрашивание.

Реакция Паули

При обработке диазореактивом в щелочной среде гистидин и тирозин образуют окрашенное в оранжевый цвет соединение:           

Сульфаниловая кислота               п-сульфобензолдиазоний

                                                    (диазобензолсульфоновая кислота)

Опыт 11.В одну пробирку вносят 1 мл раствора тирозина, в другую – 1 мл раствора белка. В каждую добавляют по 2 мл диазореактива. (готовится перед опытом, смешиванием в отдельной пробирке 1% раствора сульфаниловой кислоты в 5% растворе соляной кислоты и 5% раствора нитрита натрия в соотношении 1:3). После этого в каждую пробирку добавляют 10% раствор углекислого натрия до появления желтой или оранжевой окраски, которая постепенно становится все более интенсивной.

Оформление работы

Оформить работу следует в виде таблицы, в которой привести название реакции, название определяемого вещества, уравнение реакции, условия, при которых следует проводить реакцию, наблюдения и выводы.

Лабораторная работа № 2

Реакции осаждения белков

Реактивы и оборудование:раствор яичного белка, кристаллический сульфат аммония, насыщенный раствор сульфата аммония, 1% и 10% растворы уксусной кислоты, 10% раствор гидроксида натрия, концентрированные растворы соляной, серной и азотной кислот, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, 20% раствор сульфосалициловой кислоты, 1% раствор медного купороса, 1% раствор ацетата свинца, насыщенный водный раствор фенола, раствор формалина, этиловый спирт, спиртовки пробирки, воронки, бумажные фильтры.