Методика определения групп крови и их совместимость.

В настоящее время существует два метода определения группы крови.

Простой — определение антигенов крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и цоликлонам анти — А и анти — В. Второй метод — перекрестный, заключающийся в определении агтлютиногенов одним из указанных способов с дополнительным определением агглютининов с помощью стандартных эритроцитов.

1.Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам.

Применяют 2 комплекта стандартных изогемагглютинирующих сывороток. 1(0)- бесцв; 2(А)-голубая; 3(В)-красная и 4(АВ)-желтая. Сыворотка должна быть светлой и прозрачно, без хлопьев, осадка и помутнения.

Методика: На тарелку или предметное стекло наносятся пипетками (разными) по 1-й крупной капле сыворотки О(I), А(II), В(III). Затем стеклянной палочкой капли сывороток соединяются с каплями крови. Определение длится 5 минут, покачивая тарелку, затем к каждой смеси капель добавляют по 1-й капле физраствора и оценивают результаты. Лучше, если сыворотка будет 2-х различных серий. Результаты групп крови должны совпадать в обеих сериях. Капли исследуемой крови должны быть в 5-10 раз меньше сыворотки.

Оценка результатов:

1. Все 3 сыв. не дают агглют. – 1 гр.;2. Отриц. с сывороткой 2 и положит. с 1 и 3 – 2 гр.;

3. отриц. с 3 и положит. с 1 и 2 – 3 гр.;4. сыв. 1, 2, 3 – положит. - гр. Но надо проверить для этого проводят р-цию со станд. сывороткой 4. Отриц. р-ция относит исслед. кровь к 4 гр.

2.Определение групп крови при помощи целиклонов.

Целиклоны анти-А и анти-В предназначены для определения групп крови человека системы АВО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток, путем выявления аг А и В в эритроцитах стандартными ат, содержащимися в целиклонах.

Методика: Определение гр.кр. производится в помещении с хорошим освещением при темп. от +15° до +25°С. Определение группы крови системы АВО производится на фарфоровой или любой другой планшетке.

На планшет наносят цоликлоны анти-А и анти-В по две капли (0,1 мл) под соответствующими надписями: анти-А или анти-В. Рядом с каплями антител наносят исследуемую кровь по одной маленькой капле, приблизительно в 10 раз меньше (0,01 мл). Наблюдение за реакцией проводят при легком покачивании в течение не более 2,5 минуты. Положительный результат при определении группы крови проявляет себя агглютинацией (склеиванием) эритроцитов. При отрицательной реакции определения группы крови капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агтлютинаты в ней не обнаруживаются. Агглютинация, обычно, определяется в течении первых 3—5 секунд. Несмотря на это, наблюдение за результатами необходимо вести не меньше 2,5 минуты из-за возможности более позднего наступления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

Рез-ты: 1. агглют. отсут. с А и В – 1 гр.;2. есть с А – 2 гр;3. есть с В – 3 гр.;4. есть с А и В – 4 гр. Делают контроль с изотон. раствором.

3. Опред. по стандартнымотмытым эритроцитам с известной групповой принадлежностью.

Из вены кровь центрифуг.на тарелку с сеторами наносят сыворотки, к которым добавл. каплю станд. эритроцитов., покачивают 3 мин., затем добавляют по капле изотонич. ра-ра. .и через 5 мин. оценивают:

отс. 1 и есть 2 и 3 – 1 гр.;2. отс. 1 и 2, есть 3 – 2 гр.;3. отс. 1 и 3, есть 2 – 3 гр.;4. отс. 1 2 3 – 4 гр.

Резус - фактор. Определение совместимости крови по резус-принадлежности.

Антиген Rh — один из эритроцитарных аг системы резус, располагается на поверхности эритроцитов. В системе резус различают 5 основных аг. Основным является аг Rh (D), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Эритроциты примерно 85% людей несут этот белок, поэтому их относят к резус-положит. У 15 % людей его нет, они резус-отриц. Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни, не зависит от внешних причин. Он появляется на ранних стадиях внутриутробного развития. Несовместимость крови по резус-фактору (резус-конфликт) при переливании крови наблюдается, если эритроциты донора несут Rh-агглютиноген, а реципиент является резус-отрицательным. В этом случае у резус-отрицательного реципиента начинают вырабатываться антитела, направленные против резус-антигена, приводящие к разрушению эритроцитов.

Существует несколько методов определения Rh-фактора. Наиболее распространен метод конглютинации на чашках Петри. Для этого исследования необходимо: глазные пипетки, флакон с изотоническим раствором, чашки Петри, водяную баню с температурой 46-48 С и стандартные антирезусные сыворотки всех групп сист. АВО. Для анализа берут антирезусную сыворотку двух серий. В чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева - одной серии, справа - другой в 3 ряда для 3 исследований. В каждую серию прибавляют по капле эритроцитов (исследуемые, контрольные Rh-полож. и контрольные Rh-отриц.). После перемешивания чашку Петри помещают в водяную баню на 10 минут, после чего рассматривают в проходящем свете.

Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее - об отрицательном. Для контроля в этом методе используют Rh-отриц. и Rh-полож. эритроциты.

экспресс-метод. Реакцию проводят в пробирках без подогрева. Для этого необходима специальная, универсальная для всех групп крови системы АВО сыворотка. В пробирку помещают 1 каплю сыворотки, добавляют 1 каплю исследуемых эритроцитов и после 3-минутного покачивания заливают 3-5 мл изотонического раствора хлорида натрия, трижды переворачивают пробирку и определяют результат в отраженном свете. Наличие агглютинации свидетельствует о наличии Rh-антигена.