Экзаменационный билет № 79.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
1. Токсины бактерий, принципы их классификации, биологическое действие, генетические основы токсигенности бактерий. Суперантигены, биологический смысл.

Токсигенность - продукция бак-ми токсинов, веществ повреждающих Кл-ки ткани орг-ма хозяина. Наличие токсина у бактерий является патогенетич. значимым в ходе разв-я инфекц. процесса. Токсичн. компонент присут-ет практически при любой инф-и и проявл-ет свое дей-ие. Токсины, секр-е возб-лем в среду, обнаруж-тся в фазе роста и накапл-ся в цитопл-ме. Это белки - экзоТ. ЭндоТ.(пр.ЛПС Гр-бак-ий) входят в состав клет. стенки и высвоб-ся лишь при м\о.

ЭкзоТоксин продуцируют Гр+ и Гр- бак-ии. По своей хим. Стр-ре это белки. По мех-му д-ия экзоТ. на кл-ку разл-ют несколько типов: повыш-е прониц-ти мемб-н(гемолизины,лейкоцидин), блокады с-за белка(цитоТ.),акт-я клет. АЦ(энтероТ.),блок передачи нерв. имп-сов(нейроТ.),наруш-е межкл.связей(эксфолианты,эритрогенины

ЭндоТ., в отл-е от экзоТ, обл-ют меньш специф-ю д-ия. ЭндоТ. всех Гр- бак-ий (E. Coli и др.) угнетают фагоцитоз, вызывают падение сердечной деят-ти, гипотонию, повыш-е t-ры, гипогликемию. Большое кол-во поступившего в кровь эндотоксина приводит к токсикосептическому шоку.

Инф-я об эндоТ. Заложена в «собств» генам бак-ии.Способ-ть к обр-ю экзоТ. Часто детерминируют внехромосомн.гены-tox-гены плазмид и умеренных фагов.

СуперАГ-неспециф(поликлон) стимул-ры лимф,прежде всего Т-лимф.В отл-ии от моноклон.акт-ии,в р-цию вовл-ся множ-во клонов лимф-в,что ведет к гиперсекр-и цитокинов и sd вторичн интокс-ии.пр. энтероТ. И Т. Токсич.шока стафилококка.Известны также суперАГ,кот неспециф. Стим-ют В-лимф,выз-я поликлон. СинтезIg

ИММУНОЛОГИЯ

Базисные понятия иммунологии

Иммунитет- это совокупность реакции, напраленных на сохранение генетического гомеостаза, т.е. на очищение организма от генетически чужеродного материала.

В процессе эволюции иммунная система- комплекс специал. Лимфоидных органов и дессиминированных клеток мезенхимального происхождения, пособных выполнять им.функции.

Назначение: защита организма от воздействия био агрессий.

В анатомическом плане разделены на:

Классификация видов иммунитета:

21) в зависимости от уровня эвол. Развития

· врожденный

· приобретенный

22) от степени вовлечения в процесс им. Системы

· активный

· пассивный

23) От типа эффектора

· Гуморальный

· Клеточный

24) По локализации

· Местный

· Общий

25) По наличию или отсутствию антигена в организме

· Стерильный

· Нестерильный

Иммунитет

Антигены-генетически чужеродные вещества, способные вызывать различные формы ИО.

Антитела-специфические эффекторы гуморального иммунитета

2. Уникальные (базисные) признаки антигензависимого иммунитета:
1. Приобретаемость. 2. Специфичность. 3. Память.4. Целиком базируется на образовании антител. 5.Единственный механизм противоинфекционной резистентности.

БАКТЕРИОЛОГИЯ
3. Факторы патогенности гонококка:
1. Бактериальные экзотоксины. 2. Ферменты инвазии. 3. Пили. 4. Эндотоксин. 5. Белки наружной мембраны.

Нейссерии – грамотрицательные аэробные кокки, относящиеся к роду Neisseria, включающему 8 видов: Neisseria meningitidis, Neisseriagonorrhoeae, N. flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca.

Морфология: неподвижные неспорогенные грамотрицательные диплококки, образующие капсулу, полиморфны – встречаются в виде мелких или крупных форм а так же в виде палочек, хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зелёным и т. д.), под действием пенициллина образуют L-формы, могут менять свойства и превратиться в грамположительную форму

.
Культуральные свойства: аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленные влажные среды с добавлением нативных белков крови, сыворотки или асцитической жидкости. Не вызывают гемолиза на средах, содержащих кровь; на средах с добавлением молока, желатина и картофеля не растут. На плотных питательных средах через 24ч, при содержании протеина II образуют слегка мутные бесцветные колонии, не содержащие его образуют круглые прозрачные колонии в виде капель росы, на жидких питательных средах растут диффузно и образуют плёнку, через несколько часов оседающую на дно.
Биохимическая активность: крайне низкая – разлагают только глюкозу, продуцируют каталазу и цитохромоксидазу, протеолитическая активность отсутствует, H2S, аммиака, индола не образует.
Антигенная структура: Содержит А и К антигены, ЛПС обладают сильной иммуногенностью, основную антигенную нагрузку несут пили и белки мембраны. Наружная мембрана содержит протеины I, II, III классов, проявляющих сильные иммуногеннные свойства
Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, белки мембраны
Капсула обладает антифагоцитарным действием. Пили обеспечивают адгезию к эпителию. Клеточная стенка содержит эндотоксин. Поверхностный белок I класса – обеспечивает устойчивость к бактерицидным факторам слизистых оболочек. Класса II – (протеины мутности, ОРА-протеины) обуславливают прикрепление к эпителию, препятствуют фагоцитозу. N. синтезируют IgA протеазу, расщепляющую Ig.
Резистентность: очень неустойчивы в окружающей среде, чувствительны к действию антисептиков, высокочувствительны к пенициллинам, тетрациклину, стрептомицину. Способны к утилизации пенициллинов при приобретении бета-лактамаз.
Патогенез: Входные ворота – цилиндрический эпителий мочеполовых путей. Гонококки прикрепляются к эпителию посредством поверхностных белков, вызывают гибель и слущивание клеток, захватываются клетками, где размножаются, попадают на БМ, после чего попадают на соед. ткань и вызывают воспаление или попадают в кровь с возможным дессиминированием.
Иммунитет – почти отсутствует.
Микробиологическая диагностика:
Бактериоскопическое исследование: Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища, примой кишки, глотки, сыворотки крови. Готовят мазки, окраска по Граму, При «+» результате – обнаруживают гонококки – грам- диплококки бобовидной формы., находятся внутри лейкоцитов. Положительный диагноз ставится при острой форме гонореи до применения антибиотиков.
Бактериологическое исследование. Материал засевают на чашки Петри со специальными питательными средами — КДС, сывороточным агаром. Среда КДС содержит питательный агар с добавлением в определенной концентрации казеина, дрож­жевого экстракта и сыворотки крови. Посевы инкубируют при 37°С в течение 24—72 ч. Гонококки образуют круглые прозрач­ные колонии, напоминающие капли росы, в отличие от более мутных колоний стрептококков или пигментированных колоний стафилококков, которые также могут расти на этих средах. Подозрительные колонии пересевают в пробирки на соответствующие среды для получения чистых культур, которые идентифицируют по сахаролитическим свойствам на средах «пестрого» ряда (по­лужидкий агар с сывороткой и углеводом). Гонококк ферментирует только глюкозу с образованием ки­слоты.
Серодиагностика. В некоторых случаях ставят РСК Борде — Жангу. В качестве антигена используют взвесь убитых гонокок­ков. Реакция Борде—Жангу имеет вспомогательное значение при диагностике гонореи. Она положительна при хронической и осложненной гонорее.
Лечение: антибиотикотерапия (пенициллин, тетрациклин, канамицин), иммунотерапия. Гонококковая вакцина - взвесь гонококков, убитых нагреванием, используется для вакцинотерапии хронической гонореи.

ВИРУСОЛОГИЯ
4. Ферменты пикорнавирусов, которые могут быть мишенью для ингибиторов вирусной репликации:
1. Обратная транскриптаза. 2. ДНК-полимераза. 3. Протеазы. 4.РНК-зависимая РНК-полимераза. 5.ДНК-зависимая РНК-полимераза.

Структура.Пикорнавирусы относятся к мелким просто организованным вирусам. Диаметр вируса около 30 нм. Вирион состоит из икосаэдрического капсида, окружающего инфекционную однонитевую плюс РНК с протеином VPg. Капсид состоит из 12 пятиугольников (пентамеров), каждый из которых, в свою очередь, состоит из 5 белковых субъединиц - протомеров. Протомеры образованы 4 вирусными полипептидами: VP1, VP2, VP3, VP4. Белки VP1, VP2 и VP3 располагаются на поверхности вириона, а VP4 - внутри вирусной частицы.

Репродукция.Вирус взаимодействует с рецепторами на поверхности клетки. С помощью этих рецепторов осуществляется перенос вирусного генома в цитоплазму, сопровождающийся потерей VP4 и освобождением вирусной РНК из белковой оболочки. Геном вируса может поступить в клетку путем эндоцитоза с последующим выходом нуклеиновой кислоты из вакуоли или путем инъекции РНК через цитоплазматическую мембрану клетки. На конце РНК имеется вирусный протеин - VPg. Геном используется, как и РНК, для синтеза белка. Один большой полипротеин транслируется с

вирусного генома. Затем полипротеин протеазойрасщепляется на индивидуальные вирусные протеины, включая РНК-зависимую полимеразу. Полимераза синтезирует минус-нить матрицу с поверхности плюс-нити и реплицирует геном. VPg ковалентно присоединяется к 5'-концу вирусного генома. Структурные белки собираются в капсид, в него включается геном, образуя вирион. Время, необходимое для прохождения полного цикла размножения, - от заражения до окончания сборки вируса - обычно составляет 5-10 ч. Его величина зависит от таких факторов, как pH, температура, тип вируса и клетки-хозяина, метаболическое состояние клетки, число частиц, заразивших одну клетку. Вирионы освобождаются из клетки посредством ее лизиса. Репродукция происходит в цитоплазме клеток и сопровождается цитопатическим действием. В культуре клеток под агаровым покрытием вирусы образуют бляшки.

Экзаменационный билет 80

1.Микробиологический анализ как основа лабораторной диагностики инфекционных заболеваний. Принципы и основные методы.

Сущ-ет 3 метода микробиол диаг-ки инфекций: культуральн.,экспресс-метод,имуннологич.анализ.

Културальн(бактериологич).метод-выдел-е и накопл-е чистой культуры бак-ий с ее послед. Идентиф-ей.Особ-ть: многоэтап-ть. Минус- длит-ть.Методы предв.класиф-ии:

1)морф.анализ бак.колоний

2)микроскоп-я окраш бак-ий

Для окончат.индетиф-ии бак-ий: изуч-е б\х акт-ти (биотипирование);обнаруж-е бак.Аг(серотип-е);опр-е чув-ти к бактериофагам (фаготипир-е)

Экспресс-диаг-ка основана наобнаруж-и бак-ий или их комп-тов непосред-но в клин.матреиале,не требует выдел-я чист.культуры.

1)микроскоп-я-быстро,но исп-ся для идентиф-и огранич. Числа м\о

2)обнаруж-е бак.Аг непосред-но в материале от б-ного с исп-ем иммунохим тестов,пр.:латекс-агглютинация для обнаруж-я n.menengitidis

3)газово-жидкостн хроматография-для обруж-я жирн.к-т,комп-тов клет.стенки или бак.токсинов,пр. для пат.клостридий

4)обнаруж-е опред.послед-тей нукл.к-т в исслед.материале(методы гибридиз-и ДНК,РНК; метод ПЦР)

Иммунолог. метод (серологический) вкл-ет классич. Серодиаг-ку, основ. на опр-ии Ат к выявл. или предполаг. Возб-лю. И Аллергодиаг-ку,основанную на выявл-и сенсибил-и у пациента к бак.Аг в ходе инф-ии

ИММУНОЛОГИЯ

Базисные понятия иммунологии

Иммунитет- это совокупность реакции, напраленных на сохранение генетического гомеостаза, т.е. на очищение организма от генетически чужеродного материала.

В процессе эволюции иммунная система- комплекс специал. Лимфоидных органов и дессиминированных клеток мезенхимального происхождения, пособных выполнять им.функции.

Назначение: защита организма от воздействия био агрессий.

В анатомическом плане разделены

Классификация видов иммунитета:

26) в зависимости от уровня эвол. Развития

· врожденный

· приобретенный

27) от степени вовлечения в процесс им. Системы

· активный

· пассивный

28) От типа эффектора

· Гуморальный

· Клеточный

29) По локализации

· Местный

· Общий

30) По наличию или отсутствию антигена в организме

· Стерильный

· Нестерильный

Иммунитет

Антигены-генетически чужеродные вещества, способные вызывать различные формы ИО.

Антитела-специфические эффекторы гуморального иммунитета

2. Индукция иммунного ответа предполагает участие следующих факторов и клеток:

1. Антигены. 3. В-лимфоциты. 4. Т-лимфоциты.

Индукция иммуного ответа (иммуногенез) это антиген зависимая активация "наивных" лимфоцитов, которая завершается образованием эффекторов приобретенного иммунитета и клеток памяти. Индукция иммуного ответа это результат индуцированного взаимодействия иммунокомпетентных клеток.

В процессе индукции начинается специфическая фаза ИО. Развивается в периферической лимфоидной ткани. Для ее развития должен поступить АГ. Он может поступить в организм различными путями (кожа, слизистая, кровь, лимфа) .

Клетки и молекулы, учавствующие в индукции ИО:

· АПК . Главная функция: обработка АГ, транспорт АГ в сумму лимфоцитарных реакций, презентация Т-хелперам, костимуляция Т-лимфоцитов.

К ним относятся дендритные клетки, макрофаги, В-лимфоциты. Если это первичная встреча - это дендритные клетки, если повторно - макрофаг. На пов-ти маркером для них является HLA-II.

Дендритные клетки осуществляют выработку цитокинов.

· Т-лимфоциты. Выполняют регуляторные функции и перенос инфекции с АГ на В-лимфоциты.

· В-лимфоциты. Получают информацию об АГ, поэтапно превращается АПК, вырабатывается АТ.

Кроме них учавствуют цитокины.

3. Положения, справедливые для дифтерийного токсина:

1. Бифункциональность.3. АДФ-рибозилтрансфераза. 5. Блокирует синтез белка.

Коринебактерии. Вид Corinebacterium diphtheriae, род Corinebacterium(булава) семейство Corynebacteriaceae отдел Firmicu-tes.Дифт-антропоноз заб.Неподвижные прямые или слегка изогнутые палочки. Видо-вой эпитет отражает характер местного патогенетического процесса(дифтиритич пленка). Гр+. Облад. Метахромазией. распо-ложение палочек в мазке под углом друг к другу, в виде «растопыренных пальцев». Большинство видов- облигатные паразиты слизистых оболочек человека и животных. Резервуар инфекции- больной или носитель, путь передачи- воздушно-капельный. Пик заболеваемости приходится на осенне-зимние месяцы. Спор, капсулы нет. Фимбрии есть Для дифтерийной палочки характерен выраженный полиморфизм. Выделяют 3 биовара(gravis-R формы; mitis – S формы, обр тельца Ба!беша-Эрнста; intermedius). Пита-тельные среды должны содержать рост. факт.Факул.аэроб. Хемоорганотроф Харак-таристический признак- цистиназная актив-ность и не фермент сахарозу и разлагать мочевину. Образует бактериоцины. Антиген-ная структура: О(термолаб представлены межвидовыми аг) и К-Аг(обеспеч видов спецеф и выражен иммуногенность).

Токсинообразование: экзотоксин, обеспечи-вает мономолекулярную специфич. интокси-кацию. избирательно поражает сердечную мыш, надпочечн и периферич. Нерв. сист. Его синтезируют не все штамы бактерии, лишь лизогенные штаммы. Кодируется умеренным фагом (токс+ген) негомологичная рекомби-нация, лизогения). Токсин бинарен, состоит из двух субъединиц: В-обеспечивает рецеп-цию(эндоцитоз), А-АДФ-рибозилтрансфераза, блокирует синтез белка(мишень ФЭ2). Токсин характеризуется бифункционально-стью..

Микробиол и патоген сущн дифтирии: очаго-вая инф(деструкция эпител и эндетел. Гипер-эксудация,подавл фагоцитоза, образ псевдо-мембр), мономолекуляр интоксик

Патогенез поражений: входные ворота- слизистые оболочки дыхательных путей, иногда глаз, половых органов, поврежден кожн покровы. Возникает местное фибриноз-ное воспаление. Пленка плотно спаяна с тканями- это дифтеритический тип фибриноз-ного воспаления. Дифтерия- очаговая инфек-ция.

Диагностика. Материал- слизь из носоглотки, пленки- окраска по Граму, Найссеру (позво-ляет выявить зерна Бабеша-Эрнста(валютина)). Культивирование на агаре сывр. или среде с теллуритом(востан теллур). Исследование биохимии. Определе-ние токсигенности- биологическая про-ба.ИФА. Основное содержание микробиоло-гического анализа при дифтерии- определе-ние токсигенности изолированной культуры. (вводят морск свин дифт, одному анатоксин), Применяется тест иммунодиффузии Илека. Фаготипирование.

Лечение: введение антитоксина. Антимикроб препараты

Профилактика: -введение анатоксина в составе АДС (анатоксин дифтерийно-столбнячный), АКДС (адсорбированная дифтерийно-столбнячная вакцина на Al(OH)3).с 3мес.Иммунитет зависит от антитоксических антител.

4. Для пикорнавирусов характерны следующие признаки:

1. Кубический (икосаэдральный) тип симметрии. 2. (+) РНК. 3. Репли-кация в цитоплазме. 4. Цитолиз клеток-мишеней.

ПИКОРНАвирусы

Таксономия.: семейство Picornaviridae, род Enterovims, вид Poliovirus.

Структура. По структуре полиовирусы — ти-пичные представители рода Enterovirus. РНК-содержащие вирусы.

Морфология: мелкие, просто организованные вирусы, сферической формы, состоят из одноцепочечной РНК и капсида.

Культивирование: Хорошо репродуцируются в первичных и перевариваемых культурах клеток из тканей человека и сопровождается цитопатическим эффектом. В культуре клеток под агаровым покрытием энтеровирусы образуют бляшки.

Антигенные свойства: Различают 3 серотипа внутри вида: 1, 2, 3, не вызывающие перекрестного иммунитета. Все серотипы патогенны дл человека.

Патогенез и клиника. Естественная воспри-имчивость человека к вирусам полиомиелита высокая. Входными воротами служат слизистые оболочки верхних дыхательных путей. Первичная репродукция вирусов происходит в лимфатических узлах глоточного кольца и тонкой кишки. Из лимфатической системы вирусы проникают в кровь, а затем в ЦНС, где избирательно поражают клетки передних рогов спинного мозга (двигательные нейроны). Инкубационный период продолжается в среднем 7—14 дней. Различают 3 клинические формы полиомиелита: паралитическую, менингеальную (без параличей), абортивную (легкая форма). Заболевание начинается с повышения температуры тела, общего недомогания, головных болей, рвоты, болей в горле.

Иммунитет. После перенесенной болезни остается пожизненный типоспецифический иммунитет. Иммунитет определяетс наличием вируснейтрализующих антител, среди которых важная роль принадлежит местным секреторным антителам слизистой оболочки глотки и кишечника (местный иммунитет). Пассивный естественный иммунитет сохраняется в течение 3—5 недель после рождения ребенка.

Микробиологическая диагностика. Материал для исследования - кал, отделяемое носоглотки, при летальных исходах — кусочки головного и спинного мозга, лимфатические узлы.

Вирусы полиомиелита выделяют путем заражения исследуемым материалом первичных и перевиваемых культур клеток. О репродукции вирусов судят по цитопатическому действию. Идентифицируют выделенный вирус с помощью типоспецифических сывороток в реакции нейтрализации в культуре клеток. Важное значение имеет внутривидовая дифференциация вирусов, ко-торая позволяет отличить патогенные штаммы от вакцинных штаммов, выделяющихся от людей, иммунизированных живой полиомиелитной вакциной. Различия между штаммами выявляют с помощью ИФА, реакции нейтрализации цитопатического действия вируса в культуре клеток со штаммоспецифической иммунной сывороткой, а также в ПЦР.

Серодиагностика основана на использовании парных сывороток больных с применением эталонных штаммов вируса в качестве диагностикума. Содержание сывороточных иммуноглобулинов классов IgG, IgA, IgM оп-ределяют методом радиальной иммунодиффузии по Манчини.

Лечение. Патогенетическое. Применение гомологичного иммуноглобулина для пре-дупреждения развития паралитических форм ограничено.

Профилактика. Основной мерой профилактики полиомиелита является иммунизация. Первая инактивированная вакцина(убитая вакц, факт иммун-а: сывороточные IgG-АТ) для профилактики – создавала общий гуморальный иммунитет, не формировала местной резистентности слизистых оболочек ЖКТ, не обеспечивала надежную защиту.

Пероральная живая культуральная вакцина из трех серотипов штаммов. Используют для массовой иммунизации детей, она создает стойкий общий и местный иммунитет(мукозальная вакцина, вакторы иммунит:секретор IgA-АТ и сывороточные IgG-АТ).

Неспецифическая профилактика сводится к санитарно-гигиеническим мероприятиям.

Признаки: икосаэдр(кубичес тип симметрии), +РНК(те ведет себя как мРНК), репликац в цитоплаз, цитолиз Кл-миш. Ферм-ты: протеазы, РНК-завРНК-пол. Энтеровирусы: вход ворота инф-и, зоны первич размнож, патоген знач вирусем, выс %бессимп инф, АГ-консерв, устойч-ть.Полиовирусы: род Enterovirus, сем Picornov-ae, длит нос-во, нейротропн-ть.Полиовирусы: гематог раср-ие в ЦНС, аксон тр-т в ЦНС, фек-ор зараж, аэроген зараж, длит выдел с фек, выс резист-ть.Протект АГ: типосп АГ, выз обр-е вируснейтр АТ. Полиомиел вакц: поливалентная, индуц типосппец гумор им-т, живая, убитая.