Экзаменационный билет № 66.

ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
1.Принципы культивирования бактерий. Ростовые факторы. Условия, влияющие на рост и размножение бактерий. Питательные среды и их классификация. Работы Р. Коха.

Рост- координированное воспроиведение всех клет стр-р и компонентов,которое ведет кувеличение массы клетки. Размножение-увеличения числа клеток в популяции.

Существует график,отраж эти процессы,котрорая называется кривой роста.

Фазы: 1. Лаг –фаза- время от посева до начала размножения. Это 2-5 ч. Здесь идет адаптация м.о. к новым условиям.

2. логарифмическая фаза- характериз постояной максимал скоростью деления клеток. Скорость зав-т от самих бак и среды. Время генерации-время удвоения клеток.

3. стационарная фаза-наступает когда число клеток перестает увеличиваться.Снижеие скорости происходит из-за большой плотности бакт,накопления токсич продуктов обмена и уменьш питат в-в. Несколько часов по времени. И зависит от вида бакт

4.Фаза отмирания-из-за накопления кислых продуктов обмена или в рез аутолиза под влияние собсвенных ферментов. Длиться от десяка часов до нескольких недель.

Питательные вещества: 1Органогены-углерод,азот,кислород.водород. 2Химич элементы-медь.железо,йод и тд. 3. Факторы роста- АК,витамины,пурин и пиримидин основания Температурный фактор: мезофилы( 37 градусов),термофилы(55-600 гр) и психрофилы(3-150 гр). Освещение (необходим свет для фототрофов), отсутсвие или наличие кислорода.

Микроорганизмы культивируют на искусственных питательных средах. В зависимости от пищевых потребностей пит среды должны содержать исходные вещ-ва необходимые для метаболизма.

Условия культивирования также зависят от свойств соответствующих микроорганизмов. Большинство патогенных микробов выращивают при Т 37 С в течение 1-2 суток. Для стимуляции процессов роста и размножения анаэробных микробов используют метод глубинного культиврования, который заключается в непрерывном аэрировании и перемешивании пит среды. Для культивирования анаэробов используют особые методы сущность которых заключается в удалении воздуха или замены его инертными газами в анаэростатах. Их выращивают на пит средах содержащих напр глюкозу.

Питательные среды

1.По происхождеию: искусств и естетвенн( кровь,желчь)

2.По конистенции: жидк,полужидк и плотные. Плотность достигаеться внесением агара

3. По составу: простые(питател бульон) и сложные(кровяной агар)

4. По назнаению: основные — служат для культивирования большинства патогенных микробов. специальные — служат для выделения и выращивания микроорганизмов, не растущих на простых средах.

•     элективные(избирательные) — служат для выделения определённого вида микробов, росту которых они благоприятствуют, задерживая или подавляя рост сопутствующих микроорганизмов. дифференциально-диагностические — позволяют отличить один вид микробов от другого по ферментативной активности.

•     консервирующие — предназначены для первичного посева и транспортировки исследуемого материала.

ИММУНОЛОГИЯ 3,4
Иммуноглобулины. Антитела

Антитела- специфические эффекторы гуморального иммунитета.

Биохим и клеточная природа антител:

1)крупные гликопротеины

2)белки плазмы крови, участвующие в ИО-иммуноглобулины

3) при электрофорезе АТ мигрируют в основном с фракцией гаммаглобулинов

Клеточная природа антител:

Продуцируются плазматическими кл- потомками клона специфических В-лимфоцитов, котрые контактировали с соотв антигеном

Специфичность АТ: конкретный Ig способен связываться с АГ, вызвавшим его образование.

Антитела имеют форму буквы Y: каждая структурная единица-домен; с антигеном взаимодействуют вариабельные домены.

Большинство молекул иммуноглобулинов составлено из двух тяжелых (H) цепей и двух легких (L) цепей, соединенных дисульфидными связями. Легкие цепи состоят или из двух k-цепей, или из двух l-цепей. Тяжелые цепи могут быть одного из пяти классов (IgA, IgG, IgM, IgD и IgE).

Каждая цепь имеет два участка:

1) постоянный. Остается постоянным в последовательности аминокислот и антигенности в пределах данного класса иммуноглобулинов;

2) вариабельный. Характеризуется большой непостоянностью последовательности аминокислот; в этой части цепи происходит реакция соединения с антигеном.

Каждая молекула IgG состоит из двух соединенных цепей, концы которых формируют два антигенсвязывающих участка. На вариабельном участке каждой цепи имеются гипервариабельные участки: три в легких цепях и четыре в тяжелых. Разновидности последовательности аминокислот в этих гипервариабельных участках определяют специфичность антитела. При определенных условиях эти гипервариабельные области могут также выступать в роли антигенов (идиотипов).

Понятия об аллотипах, идиотипах.

Аллотипантител определяется константными доменами и каркасными участками вариабельных доменов H и L цепей.

Идиотипопред-ся структурным своеобразием вариабельных доменов, формирующих паратоп.

Динамика антител в ходе первичного и вторичного ИО:

После поступления чужеродного АГ в организм через несколько дней начинают появляться антитела плазмы крови. В процессе инфекционного заболевания концентрация антител увеличивается. Приблизительно через 3 дня появляются IgM, затем в небольшом кол-ве IgG.

Реакция на первый и повторный контакт отличаются.

2. Образование секреторного IgA (sIga) включает:
1. Трансэпителиальную секрецию димера IgA. 2. Присоединение Fc-фрагмента. 3. Присоединение Fab-фрагмента. 4. Присоединение S-фрагмента. 5. Трансэпителиальную секрецию мономерного IgA.

IgA синтезируется в димерной форме и после связывания с иммуноглобулиновым рецептором, синтезированным в эпителиальных клетках, транспортируется на поверхность слизистой оболочки. В момент выхода IgA в просвет кишечника рецептор частично расщепляется, в результате чего в составе IgA остается фрагмент рецептора, который называют секреторным компонентом. Таким образом, секреторный IgA является продуктом кооперации двух типов клеток — плазматических и эпителиальных.

БАКТЕРИОЛОГИЯ
3. Существование риккетсий эпидемического сыпного тифа в природе поддерживается следующими факторами:
1. Социальное неблагополучие. 2. Персистенция возбудителя в организме переболевших людей. 3. Реактивация эдогенной инфекции. 4. Возможность внечеловеческого резервуара инфекции. 5. Трансовариальная передача возбудителя у вшей-переносчиков.

Риккетсии представляют собой самостоятельный класс, который делится на подклассы a1, a2, b и g.

a1 включает в себя семейство Rickettsiaceae, наиболее важными из которого являются два рода.

1. Род Rickettsia, виды делят на две группы:

2.род Bartonella, подразделяемые на виды:

Риккетсии – это бактерии, отличительной чертой которых является облигатный внутриклеточный паразитизм. По своему строению близки к грамотрицательным бактериям. Имеются собственные ферментные системы. Неподвижны, спор и капсул нет.

Для риккетсий характерен выраженный полиморфизм. Выделяют четыре формы:

1) форму А – кокковые, овальные, расположенные одиночно или в виде гантелей;

2) форму В – палочки средней величины;

3) форму С – бациллярные риккетсии, крупные палочки;

4) форму D – нитевидные, могут давать ответвления.

Морфология зависит от стадии инфекционного процесса. При острой форме в основном встречаются формы А и В, при хронической, вялотекущей – С и D.

Взаимодействие риккетсий с клеткой включает в себя несколько этапов.

1. Адсорбция на рецепторах соответствующих клеток.

2. После прикрепления мембрана делает инвагинацию, риккетсия погружается в клетку в составе вакуоли, стенки которой образованы мембраной клетки.

3. Далее возможны два варианта:

1) одни виды риккетсий продолжают оставаться внутри вакуоли и там размножаются;

2) другие лизируют мембрану и свободно лежат в цитоплазме.

4. Риккетсии интенсивно размножаются, мембрана разрушается, и они выходят из клетки.

Облигатный внутриклеточный паразитизм риккетсий реализуется на клеточном уровне.

Поскольку риккетсии – внутриклеточные паразиты, то в питательных средах они не размножаются. Для их культивирования применяются те же методы, что и для культивирования вирусов:

1) заражение ткани;

2) заражение куриных эмбрионов;

3) в организме экспериментальных животных;

4) в организме эктопаразитов.

Риккетсиозы

К наиболее распространенным риккетсиозам относят эпидемический сыпной тиф. Возбудитель – R. Provacheka. Источник инфекции – больной человек. Переносчик – платяные и головные вши.

Это полиморфные микроорганизмы. Размножаясь в клетках хозяина, образуют микрокапсулу. Аэробы. Культивируются в куриных эмбрионах.

Имеют два антигена:

1) группоспецифический (обладает иммуногенными свойствами и является протективным);

2) корпускулярный, видоспецифический (имеется только у данного вида).

Заболевание начинается после поступления возбудителя в кровь. Адгезия риккетсий происходит на эндотелиоцитах капилляров. В цитоплазме этих клеток происходит их размножение. После разрушения клеток новая генерация риккетсий выходит в кровь. Поражение капилляров приводит к образованию тромбов и гранулем. Наиболее опасная локализация поражения – ЦНС. На коже появляется сыпь. Помимо прямого действия, риккетсии выделяют эндотоксин, вызывающий парез капилляров.

После заболевания остается напряженный антимикробный иммунитет.

Диагностика:

1) серодиагностика – основной метод (РПГА, РСК с диагностикумом из R. Provacheka);

2) бактериологическое исследование; исследуемый материал – кровь; проводится только в лабораториях специального режима;

3) ПЦР-диагностика.

Специфическая профилактика: живая сыпнотифозная вакцина.

Этиотропная терапия: антибиотики – тетрациклины, фторхинолоны.

К наиболее распространенным риккетсиозам относят и эндемический (крысино-блошиный) тиф. Возбудитель – R. typhi. Источник инфекции – крысиные блохи, вши, гамазовые клещи. Пути заражения – трансмиссивный, воздушно-капельный.

Патогенез и клинические проявления заболевания сходны с эпидемическим сыпным тифом.

R. typhi имеют видоспецифический антиген, по которому их дифференцируют от других риккетсий.

Диагностика:

1) биологическая проба – заражение материалом от больных морских свинок;

2) серодиагностика – РСК, ИФ.

Нужно сказать и о ку-лихорадке. Возбудитель – C. burneti. Источник инфекции – домашний скот. Пути передачи – алиментарный, контактно-бытовой.

Это мелкие палочковидные или кокковидные образования, окрашивающиеся по Романовскому—Гимзе в ярко-розовый цвет. Они образуют L-формы. Культивируются в желточном мешке куриного эмбриона.

Имеют два антигена: растворимый и корпускулярный.

Устойчивы к факторам внешней среды.

После проникновения C. burneti в организм возникает риккетсемия. Размножение микроорганизмов происходит в гистиоцитах и макрофагах, после разрушения которых отмечаются генерализация процесса и токсинемия. В процессе инфекции развивается реакция гиперчувствительности замедленного типа, формируется напряженный иммунитет.

Заболевание характеризуется неясной клинической картиной.

Диагностика:

1) серологическое исследование (РСК, РПГА);

2) кожно-аллергическая проба (как ретроспективный метод диагностики).

Специфическая профилактика: живая вакцина М-44.

Лечение: антибиотики – тетрациклины, макролиды.

ВИРУСОЛОГИЯ
4. Факторы и механизмы, инициирующие и поддерживающие ВИЧ-персистенцию:
1. Интегративная вирогения. 2. Селекция иммунорезистентных клонов. 3. Мутабельность ВИЧ-генома. 4. Негативный самоконтроль за репликацией. 5. Наличие резервуаров с низким уровнем ВИЧ-репликации. 6. Неинтегративная вирогения.

Интегративный тип, или вирогения — характеризуется встраиванием (интеграцией) вирусной ДНК в виде провируса в хромосому клетки и их совместным сосуществованием (совместная репликация).

Структура

ВИЧ относится к семейству ретровирусов.

Вирион имеет сферическую форму, диаметром 100–150 нм. Кубический тип симметрии. Наружная (суперкапсидная) оболочка вируса состоит из бимолекулярного слоя липидов, который имеет происхождение из клеточной мембраны клетки хозяина. Из нее выступают шипы двух типов:

1) gp 120 (обладает рецепторной функцией);

2) gp 41 (обладает якорной функцией).

В эту мембрану встроены рецепторные образования. Под наружной оболочкой располагается сердцевина вируса (кор), которая имеет форму усеченного конуса. Промежуток между наружной вирусной мембраной и сердцевиной вируса заполнен матриксным белком. Внутри сердцевины располагаются две одинаковые молекулы вирусной РНК, связанные с низкомолекулярными белками р6 и р7.

Каждая молекула РНК содержит девять генов ВИЧ:

1) структурные (три гена);

2) регуляторные (три гена, они не кодируют структурных компонентов вируса, но, попав в клетку, кодируют образование веществ, которые либо угнетают активность структурных генов, либо активируют);

3) дополнительные (три гена, они содержат информацию, необходимую для продукции белков, которые управляют способностью вируса инфицировать клетку, реплицироваться и вызывать заболевание).

Выделяют три группы структурных генов:

1) gag (кодируют образование структурных белков сердцевины вируса);

2) pol (направляют синтез белков – вирусных ферментов);

3) ent (кодируют синтез оболочечных белков gp 120 и gp 41).

Концы каждой молекулы РНК содержат дублированную последовательность РНК. Эти участки действуют как переключатели для управления процессом вирусной транскрипции, взаимодействуя с белками ВИЧ или белками клетки хозяина.

Кроме РНК, там же находятся вирусные ферменты:

1) обратная транскриптаза; осуществляет синтез вирусной ДНК с молекулы вирусной РНК;

2) протеаза; участвует в «нарезании» предшественников вирусных белков при созревании новой вирусной частицы;

3) эндонуклеаза (интеграза); производит встраивание вирусной ДНК в геном клетки хозяина, в результате чего образуется провирус.

Антигенными свойствами обладают:

1) белки сердцевины;

2) оболочечные гликопротеины. Характеризуются высоким уровнем антигенной изменчивости, который определяется высокой скоростью замен нуклеотидов.

Интенсивная антигенная изменчивость ВИЧ происходит в организме больных в ходе инфекции и у вирусоносителей. Она дает возможность вирусу «скрыться» от специфических антител и факторов клеточного иммунитета, что приводит к хронизации инфекции.

В обычных культурах клеток ВИЧ не культивируется. Для культивирования используется культура Т-лимфоцитов с хелперной функцией.