Аспергиллез. Морфология возбудителей. Методы и критерии диагностики. Возбудители эшерихиозов. Характеристика. Лабораторная диагностика эшерихиозов.

Аспергиллез — антропонозное заболевание, микоз, вызываемое отдельными видами плесневых грибов рода Aspergillus. Чаще протекает с преимущественным поражением легких, у лиц с иммунодефицитами принимает тяжелое септическое (генерализованное) течение.

Морфология и физиология. Аспергиллы представлены септированным ветвящимся мицелием. Размножаются в основном бесполым путем, образует конидии черного, зеленого, желтого или белого цвета. Конидим отходят от одного или двух рядов клеток — стеригм (метул, фиалид), находящихся на вздутии споронесущей гифы (конидиеносца). Являясь строгими аэробами, они растут на средах Сабуро, Чапека и сусле-агаре при 24—37 °С. Через 2—4 дня на плотных средах вырастают белые пушистые колонии с последующей дополнительно окраской.

Эпидемиология. Аспергиллы находятся в почве, воде, воздухе и гниющих растениях. И 200 изученных видов аспергилл около 20 видов (A. fumigatus, A. flavus, A. niger, A. terreus, A. nidulans и др.) вызывают заболевания у человека с ослабленным иммунитетом. Аспергиллы передаются при ингаляции конидий, реже — контактным путем. Он могут попадать в легкие при работе с заплесневелыми бумагами, пылью (болезнь старьевщиков, мусорщиков). Инфицированию способствуют инвазивные методы лечения и обследования больных (пункция, бронхоскопия, катетеризация).

Патогенез и клиническая картина. У больных развиваются: инвазивный аспергиллез легких (обычно вызываемый A. fumigatus) с быстрым ростом аспергилл и тромбозом сосудов, аллергический бронхолегочный аспергиллез в виде астмы с эозинофилией и аллергического альвеолита, аспергиллома (аспергиллезная мицетома) — гранулема, обычно легких, в виде шарика из мицелия, окруженного плотно волокнистой стенкой. При иммунодефиците отмечается диссеминированный аспергиллез с поражением кожи, ЦНС, эндокарда, носовой полости, придаточных пазух носа.

Факторами патогенности грибов являются кислая фосфатаза, коллагеназа, протеаза, эластаза. Токсины аспергилл, наприме афлатоксины, обусловливают афлатоксикозы — отравления пищевой этиологии, связанные с накоплением в продуктах питания афлатоксинов A. flavus и А. parasiticus. Афлатоксины вызывают цирроз печени, оказывают канцерогенное действие. В защите против грибов участвуют гранулоциты и макрофаги, переваривающие конидии. Развивается ГЗТ.

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служат кожа, ногти, роговица, отделяемое пазух носа, наружного слухового прохода, мокрота, гной, кал, биоптаты тканей. В мазках (окрашенных по Граму, гематоксилином и эозином, по Ван-Гизону, в ШИК-реакции) выявляют септированный мицелий, цепочки конидий. Отдельные комочки мокроты переносят в каплю спирта с глицерином или в каплю 10% КОH и после надавливания покровным стеклом микроскопируют. Возможно культивирование возбудителя на питательных средах. Можно ставить кожно-аллергическую пробу, серологические реакции (РСК, РП, ИФА, РИА) и ПЦР.

Эшерихиозы - инфекционные болезни, возбудителем которых является Escherichia coli. Различают энтеральные (кишечные) и парентеральные эшерихиозы. Энтеральные эшерихиозы — острые инфекционные болезни, характеризующиеся преимущественным поражением ЖКТ. Они протекают в виде вспышек, возбудителями являются диареегенные штаммы E.coli. Парентеральные эшерихиозы — болезни, вызываемые условно-патогенными штаммами E.coli — представителями нормальной микрофлоры толстой кишки. При этих болезнях возможно поражение любых органов.

Таксономическое положение. Возбудитель — кишечная палочка — основной представитель рода Escherichia, семейства Enterobacteriaceae, относящегося к отделу Gracilicutes.

Морфологические и тинкториальные свойства. E.coli — это мелкие грамотрицательные палочки с закругленными концами. В мазках они располагаются беспорядочно, не образуют спор, подвижны за счет перитрихиально расположенных жгутиков. 

Культуральные свойства. Факультативный анаэроб, оптим. темп. для роста - 37С. E.coli не требовательна к питательным средам и хорошо растет на простых средах, давая диффузное помутнение и придонный осадок на жидких и образуя колонии в R-и S-формах (колонии в S-формах гладкие, блестящие и полупрозрачные) на плотных средах.

Биохимические свойства. Обладают выраженной биохимической активностью. Для диагностики эшерихиозов используют дифференциально-диагностические среды с лактозой — Эндо, Левина. Способны к продукциии кислоты и газа при ферментации глюкозы, ферментации лактозы, к продукции индола, отсутствие продукции сероводорода.

Антигенная структура. Кишечная палочка обладает соматическим О-, определяющий серогруппу. Поверхностный К-антиген может быть представлен 3 антигенами: A, B, L, отличающимися по чувствительности к температуре и химическим веществам. У эшерихии встречается более 97 разновидностей К-антигена преимущественно В-типа. Он обладает способностью маскировать О-антиген, вызывая феномен О-инагглютинабельности.В этом случае О-антиген можно выявить только после разрушения К-антигена кипячением. Типоспецифическим антигеном является Н-антиген, определяющий серовары, которых насчитывается более 57.

Резистентность. В течение нескольких месяцев сохраняется в воде и почве. Будучи неприхотливым к питательным средам, быстро размножаются в пищевых продуктах, особенно молочных. Погибают при нагревании при 55 ° в течение 60 мин, при 60 ° — в течение 15 мин. В окружающей среде способны переходить в не культвируемую форму.

Экология и особенности распространения. Вид Е. coli не является однородным, среди них выделяют условно-патогенные и патогенные эшерихии.

Условно-патогенные эшерихии. Основная масса эшерихий является облигатным представителем микрофлоры кишечника и влагалища человека. В составе микрофлоры толстого кишка они выполняют много полезных функций: являются антагонистам патогенных кишечных бактерий, гнилостных бактерий и грибов рода Candida. Участвуют в синтезе витаминов, группы В, Е и К, частично расщепляют клетчатку. Эти эшерихии рассматриваются как непатогенная флора, хотя в редких случаях (у лиц с иммунодефицитом) при попадании в другую экологическую нишу они могут вызывать инфекционное заболевание, протекающее в виде сепсиса, вторичной пневмонии, нагноения ран.

С испражнениям эти эшерихии выделяются в окружающую среду. Присутствие кишечной палочки в воде, почве, продуктах, предмета обихода является показателем фекального загрязнения.

Патогенные эшерихии отличаются от условно-патогенных возможностью синтеза факторов патогенности, которые генетически связаны с наличием островков патогенности, конвертирующих фагов и плазмид вирулентности. Патогенные эшерихии подразделяются на возбудителей парентеральных эшерихиозов и диареегенные. Возбудители парентеральных эшерихиозов способны вызвать генерализованный процесс в виде сепсиса и менингита. Около 80% менингитов связаны с Е. coli, которой новорожденный заражается при прохождении через родовые пути. Е. coli, вызывающая менингит у новорожденных, обладает микрокапсулой, состоящей из гомополимера сиаловой кислоты. Наличие микрокапсулы придает возбудителю антифагоцитарные свойства, так как микрокапсула перестает опсонизироваться из-за потери способности активировать комплемент.

Диареегенные эшерихии также не являютс однородной группой, они подразделяются на ЭПКП, ЭГКП, ЭТКП, ЭИКП, ЭАКП.

Эпидемиология. Источник энтеральных эшерихиозов - больные люди. Механизм заражения — фекально-оральный, пути передачи—алиментарный, контактно-бытовой.

Патогенез. Полость рта. Попадает в тонкую кишку, адсорбируется в клетках эпителия с помощью пилей и белков наружной мембраны. Бактерии размножаются, погибают, освобождая эндотоксин, который усиливает перистальтику кишечника, вызывает диарею, повышение температуры тела и другие симптомы общей интоксикации. Выделяет экзотоксин - тяжелая диарея, рвоту и значительное нарушение водно-солевого обмена.

Клиника. Инкубационный период составляет 4 дн. Болезнь начинается остро, с повышения температуры тела, болей в животе, поноса, рвоты. Отмечаются нарушение сна и аппетита, головная боль. При геморрагической форме в кале обнаруживают кровь.

Микробиологическая диагностика. Основной метод — бактериологический.

Исследуемый материал — при кишечных эшерихиозах служат испражнения, при парентеральных — материал из соответствующего инфекционного очага (моча, отделяемое раны, кровь, ликвор).

1 день. Посев испражнений на среду Эндо (для выделения чистой культуры).

2 день. Типичные лактозоположительные колонии (патогенные и условно-патогенные) — малиновые с металлическим блеском. Отбор 10 колоний производят с помощью реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной ОК-А сывороткой (с целью отбора подозрительных колоний).

Колония, материал из которой дает положительную реакцию агглютинации откалывается на скошенный МПА. Если ни одна из 10 исследованных колоний не дает положительного результата (возникает помутнение) — выдают отрицательный ответ.

3 день. Серотипирование выделенной культуры.

а) Постановка повторной РА с ОК-А сывороткой, в случае положительной реакции — испытание культуры в РА с адсорбированными поливалентными сыворотками ОК-В, ОК-С, ОК-Д более узкого спектра.

б) в случае положительной реакции с одной из указанных сывороток, проведение РА с моновалентными адсорбированными ОК-сыворотками, входящими в состав поливалентной, с живой культурой и прогретой 30 мин при температуре 100С. Нативная культура микроорганизмов — для обнаружения К-АГ; прогретая культура микроорганизмов — для обнаружения О-АГ.

При отсутствии адсорбированных О-сывороток, подтверждают принадлежность культуры к ОК-группе в развернутой пробирочной РА с живой и прогретой культурами.

Аналогично, проводится серотипирование по Н-антигену. По совокупности определенных разновидностей О-, К-, Н-антигенов устанавливают серовар штамма эшерихий.

4 день. Определение антибиотикорезистентности.