Самостоятельная работа студентов

Работа № 1. Количественное определение протеолитической активности желудочного сока по Ансену.

Принцип метода.О протеолитической активности желудочного сока судят по количеству образующихся при расщеплении казеина неосаждаемых ТХУ пептидов, концентрация которых соответствует концентрации определяемого в них тирозина.

Техника выполнения работы.В две центрифужные пробирки отмерить по 1 мл желудочного сока, разведенного в 10 раз. В опытную пробирку добавить 1 мл 5 % раствора казеината натрия, в контрольную – 2 мл 5 % ТХУ. Содержимое пробирок перемешать, поместить в термостат при температуре 38° С на 20 мин. После термостатирования в контрольную пробу добавить 1 мл 5 % раствора казеината натрия, в опытную – 2 мл 5 % ТХУ. Выдержать 15 мин, далее центрифугировать 15 мин при 3000 об/мин. После этого отобрать в 2 биологические пробирки по 1 мл центрифугата (надосадочной жидкости) и по 5 мл 0,5 н раствора Na₂CO₃. При перемешивании в обе пробирки добавить по 1 мл реактива Фолина и выдержать 20 мин.

Оптическую плотность опытного раствора измерить на ФЭКе при длине волны 760 нм (красный светофильтр) в кювете толщиной 10 мм против контроля. Концентрацию тирозина (С_тир) найти по калибровочному графику. Рассчитать активность по формуле:

А= 2× С_тир (мкМ/мл мин).

В норме протеолитическая активность желудочного сока равна 0,15-0,5 мкМ/мл мин.

Работа №2. Определение активности уропепсина.

Метод основан на способности пепсина в определенных условиях расщеплять белковую молекулу гемоглобина с освобождением тирозина и триптофана. По концентрации последних судят о пептической активности желудочного сока или мочи. Около 1% пепсиногена, вырабатываемого клетками слизистой оболочки желудка, поступает в кровь и выводится почками с мочой в виде уропепсиногена.

Техника проведения работы.Определение уропепсина.

Из суточного количества мочи отбирают 20 мл, помещают в градуированный цилиндр, подкисляют раствором соляной кислоты до pH 1,5 и доводят дистиллированной водой до 25 мл. Таким же путем доводят раствор гемоглобина до pH 1,5. В пробирку отмеривают 1 мл подкисленной мочи, добавляют 5 мл раствора гемоглобина, перемешивают и выдерживают на водяной бане при 37* в течение 30 мин. Затем добавляют 10 мл 5% раствора ТХУ, перемешивают, фильтруют и в фильтрате определяют тирозин. Для этого к 2 мл фильтрата добавляют 5 мл дистиллированной воды, 8 мл раствора щелочи и 3 мл реактива Фолина, предварительно разведенного водой в 3 раза. После добавления последнего развивается голубая окраска. Через 30 мин на ФЭКе определяют оптическую плотность при длине волны 580 нм. Опыт сравнивают с контролем, в контроле моча заменяется дистиллированной водой. Расчет содержания пепсиногена в суточном количестве мочи производят по формуле:

П сут =20×Д×V×X (Ед/24часа),

где Д- оптическая плотность опытного раствора; X- количество тирозина в мг, которое определено по калибровочной кривой ; V- объем мочи за 24 часа.

Определение пепсина в желудочном соке производят аналогичным способом, с той лишь разницей, что для исследования берут 5 мл желудочного сока. Расчет производят на 100 мл желудочного сока.

Эталоны ответов на тесты

Вид 1.1.1. – б, е; 1.2 - б.

Вид 2.2.1. 1- б, в, г; 2- а, д, ж ; 3-е; 2.2. 1- в, г; 2 – а, б, д.

Вид 3. 3.1. 1 –а, 2 – б;3.2. 4 – а, 1 – б, 2,3 – в.

Вид 4. 4.1. С (+, -, -); 4.2 Д (-, +, -).

Эталоны ответов на ситуационные задачи

Задача 1. Острый панкреатит. Аутолиз (самопереваривание) ткани поджелудочной железы протеолитическими ферментами.

Задача 2. 1) пепсин расщепит химотрипсин;

             2) химотрипсин расщепит пепсин;

             3) ничего не произойдет.

Задача 3. 100г белка содержат 15 г N

                       60 г  белка содержат: 60×15/100=9 г  N

С мочой выделяется 14 г азота, поступает с пищей 9 г азота. Отрицательный азотистый баланс.

Занятие № 2. Обмен аминокислот. Обезвреживание аммиака.

Цель занятия. Усвоить пути превращения аминокислот, углубить и закрепить знания о способах обезвреживания аммиака в тканях.

Содержание занятия.

Студентам предстоит пройти проверку выполнения заданий по самоподготовке, дать ответы на тесты контроля исходного уровня знаний и вопросы преподавателя, решить ситуационные задачи, прослушать доклад по теме УИРС, овладеть методами определения активности АСТ и АЛТ, а также определения содержания мочевины в моче.

Методические указания к самоподготовке

При подготовке к занятию, используя лекции, учебники и дополнительную литературу, выполните следующие задания: