Краткая характеристика методов оценки Т- и В-лимфоцитов

Все лабораторные методы по оценке Т- и В-лимфоцитов можно разделить на качественные и количественные.

Для количественного определения в крови В-лимфоцитов используют:

• метод розеткообразования с эритроцитами мыши (ЕАС-РОК);

• применение флюоресцирующих МкАТ к рецепторам В-клеток (CD19, CD20, CD21 и т.д.) путем последующей оценки результата реакции метод флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии.

• метод магнитной иммуносепарации, основанный на использовании МкАТ, обработанных полистероловыми магнитными частицами, к рецепторам В-лимфоцитов.

Для количественного определения в крови Т-лимфоцитов используют:

• метод спонтанного розеткообразования с эритроцитами барана (Е- РОК);

• применение флюоресцирующих МкАТ к рецепторам Т-клеток (CD3, CD4, CD8, CD25) путем последующей оценки результата реакции метод флуоресцентной микроскопии, проточной цитофлуориметрии.

• метод магнитной иммуносепарации, основанный на использовании МкАТ, обработанных полистероловыми магнитными частицами, к рецепторам Т-лимфоцитов.

• цитотоксические тесты – для определения Т-киллеров.

Функциональную активность Т- и В-клеток можно оценить:

• в реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) на различные Т- и В-митогены. РБТЛ основана на феномене активации лимфоцитов под влиянием стимулов (митогенов или антигенов) с последующей трансформацией их в бласты (большие делящиеся клетки). Эта реакция определяет пролиферативный потенциал изучаемых клеток.

В качестве активаторов РБТЛ обычно используют фитогемагглютинин (ФГА), конканавалин А (Кон А), митоген лаконоса (МЛ), бактериальные липополисахариды (ЛПС), ферменты, стафилококковый экстракт и др. ФГА и Кон А стимулируют преимущественно Т-лимфоциты, поэтому до появления тестов розеткообразовання бласттрансформацию с этими митогенами использовали для количественной оценки популяции Т-клеток. Липополисахариды (например, Е. coli, сальмонелл и др.), антитела к иммуноглобулинам, очищенный белковый дериват туберкулина, декстраны стимулируют бласттрансформацию преимущественно В-клеток. Митоген лаконоса стимулирует клетки обоих типов. Таким образом, подбирая митогены, можно изучать функциональную активность отдельных субпопуляций лимфоцитов; подбирая оптимальные условия проведения реакции, можно в принципе давать количественную оценку содержания Т- и В-лимфоцитов в общей популяции.

• в реакции торможения миграции лейкоцитов (лимфоцитов) – РТМЛ. Подвижность лейкоцитов периферической крови, их миграция к очагам тканевой деструкции, хемотаксис к ауто- и гетероантигенам, перераспределение между лимфоидными органами при стрессорно-адаптивных реакциях являются составляющей компонентой общей системы реактивности, способности к сохранению постоянства внутренней среды. Сенсибилизированные к определенному антигену лимфоциты резко снижают скорость подвижности в среде, в которую вносят этот антиген. Реакция осуществляется при непосредственном взаимодействии антигенспецифических рецепторов с антигеном, а также через воздействие фактора, ингибирующего миграцию клеток, выделяющегося при контакте со специфическим антигеном. Этот феномен позволяет продемонстрировать органоспецифическую клеточно-опосредованную гиперчувствительность.

• путем определения, например, методом проточной цитофлуориметрии уровня содержания в крови отдельных функциональных цитокинов, выделяемых различными клетками иммунной системы.

ЛЕКЦИЯ V. Часть 1 ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВОИНФЕКЦИОННОЙ ЗАЩИТЫ

План лекции

Виды инфекционных агентов и их локализация в организме

Виды иммунного ответа на первичную инфекцию в зависимости от локализации микроорганизмов

Фазы иммунного ответа

Течение острой инфекции

Неспецифический (врожденный) иммунитет при инфекции

5.1. Механизмы антибактериальной защиты, осуществляемые эпителиальными покровами

5.2 Альтернативный путь активации комплемента

5.3 Активация макрофагов

5.4 Натуральные киллеры (NK-клетки)

6 Специфический иммунитет при инфекции

6.1 Т-клетки в антиинфекционном иммунитете

6.2 В-клетки в антиинфекционном иммунитете

7 Иммунологическая память

7.1 В-клеточная память

7.2 Т-клеточная память

Механизмы разрушения тканей патогенами

Виды инфекционных агентов и их локализация в организме

Все известные инфекционные агенты, вызывающие заболевания у человека, разделяются на 5 групп: вирусы, бактерии, грибы, протозойные, гельминты. Уничтожение их происходит с помощью разных механизмов иммунологической защиты хозяина. С патогенетической точки зрения важно разделение инфекционных агентов по месту их преимущественного роста и размножения. С этих позиций выделяют 2 основные группы микроорганизмов:

1 Интрацеллюлярные (внутриклеточные)

2 Экстрацеллюлярные (внеклеточные)

Следует отметить, что фактически все патогены проходят экстрацеллюлярную фазу, где они становятся уязвимы для действия антител. В то же время интрацеллюлярная фаза развития микроорганизмов остается недоступной для антител и в этом случае основная роль в защите от патогенов отводится Т-лимфоцитам.

Виды иммунного ответа на первичную инфекцию в зависимости от локализации микроорганизмов

Механизмы протективного иммунитета различны при разных инфекционных заболеваниях, что следует учитывать не только при назначении этиотропной терапии, но и при проведении специфической профилактики, в частности, при вакцинации (см. таблицу 1).

Следует подчеркнуть, что в элиминации внеклеточных, в основном пиогенных микроорганизмов (пневмококки, стафилококки, стрептококки и др.), главная роль принадлежит триаде: нейтрофилу, иммуноглобулину и комплементу. Гибель микроба в данном случае происходит в нейтрофиле, а комплемент и иммуноглобулины (опсонины) усиливают этот процесс.

В элиминации внутриклеточных возбудителей главная роль принадлежит триаде: Т-лимфоцитам, NK-клеткам и макрофагам, - причем, все эти 3 группы клеток обладают способностью синтезировать цитокины, резко усиливающие их функциональные свойства.

В ответ на впервые попавшую в организм человека инфекцию развивается 3 фазы иммунного ответа, отличающиеся друг от друга, как механизмами распознавания антигена, так и эффекторными механизмами (см. таблицу 1).

Таблица 1 – Основные механизмы иммунитета в зависимости от локализации возбудителя

Фазы иммунного ответа

При первом попадании возбудителя в организм человека включаются механизмы врожденного и приобретенного (адаптивного) иммунного ответа (см. таблицу 2).

Таблица 2 – Фазы иммунного ответа

В случае повторного попадания в организм того же самого возбудителя, т.е. при реинфицировании, удаление возбудителя может происходить с большей скоростью за счет сохранения протективного иммунитета и иммунологической памяти.

Протективный иммунитет – это ответ на реинфицирование путем распознавания антигена предсуществующими антителами (преформированными) и эффекторными Т-клетками памяти с последующим удалением возбудителя.

Течение острой инфекции