Примеры тестов контроля исходного уровня знаний

Вид 1. Выберите один наиболее правильный ответ:

     1.1. Компонент мочи, который  не позволяет использовать биуретовый метод для количественного определения белка в моче -

     а) мочевая кислота

     б) минеральные вещества

     в) мочевина

     г) органические кислоты 

     д) аминокислоты

Аминокислоты, придающие  белкам основный характер -

а) цистеин и метионин    

б) аргинин и лизин   

в) триптофан и фенилаланин 

г) лейцин и изолейцин      

д) глицин и аланин

1.3. Атомы остова полипептидной цепи располагаются в  порядке …

а) C-N-N-C

б) С-С-С-N

в) С-С-N-С

г) С-О-С-N

Вид 2.Установите соответствие.

2.1 Белок – выполняемая функция.

1. антитело                                 а) биологический катализатор

2. гемоглобин                            б) транспортный белок

3. актин                                      в) трофический белок

4. инсулин                                  г) сократительный белок

5. казеин                                          д) структурный белок

6. тромбин                                  е) защитный белок

7. овальбумин                            ж) регуляторный белок

8. коллаген

9. пепсин

2.2. Аминокислота – тип бокового радикала.

1- глицин                            а) полярный

2- фенилаланин                  б) неполярный алифатический

3- глутаминовая кислота   в) кислотный

4- гистидин                         г) основный

5- серин                               д) неполярный ароматический

6- лизин

7- треонин

8- аспарагин

9- валин

10-лейцин

2.3. Структура белка – стабилизирующие связи.    

1- аминокислотная последовательность     а) пептидная

(первичная структура)                               б) дисульфидная

2- β - складчатый лист                                 в) водородная

(вторичная структура)                               г) гидрофобная

3- трехмерная глобула                               д) электростатическая                                                             (третичная структура)                                         (ионная)

Вид 3. Выберите правильное сочетание ответов:

Реагенты, позволяющие определить N-концевую аминокислоту -

а) гидразин

б) динитрофторбензол

в) карбоксипептидаза

г) фенилизотиоцианат

д) восстанавливающие агенты (NаВН₄ )

Реагенты позволяющие определить С-концевую аминокислоту -

а) гидразин

б) динитрофторбензол

в) карбоксипептидаза

г) фенилизотиоцианат

д) дансилхлорид

Вид 4.Определите правильность утверждений и связь между ними:

4.1. При установлении аминокислотной последовательности проводится кислотный, а не основный гидролиз белка, так как в щелочной среде происходит разрушение некоторых аминокислот.

4.2. Длительное голодание сопровождается гипопротеинемией и, как следствие, отеками, потому что белки плазмы крови, будучи сильно гидрофильными, обеспечивают большую часть осмотического давления крови.

Примеры ситуационных задач

Задача 1.Будет ли одинаковой интенсивность окраски, полученной в реакции с биуретовым реактивом, для 100 молекул альбумина  (Mr 64000 D) и 100 молекул иммуноглобулина G (Mr 175000D)? В чем заключается принцип биуретовой реакции?

Задача 2.Подавляющее большинство протеиногенных аминокислот дают синее окрашивание с нингидрином, а пролин и оксипролин – желтое. Объясните это различие, принимая во внимание химизм нингидриновой пробы и особенности структуры протеиногенных аминокислот.

Самостоятельная работа студентов

Работа № 1. Количественное определение белка сыворотки крови биуретовым методом.

Клинико-диагностическое значение.Сыворотка крови содержит смесь белков, различных по физиологическому значению, структуре и физико-химическому свойству. Нормальное содержание белка в сыворотке крови 65-80 г/л, у детей до 6 месяцев 48-56 г/л.

Изменение содержания белка в сыворотке крови может свидетельствовать о различных нарушениях. Снижение содержания белка (гипопротеинемия) может наблюдаться при потерях белка (кровотечения, болезни почек), при белковом голодании или при снижении процессов биосинтеза белка в результате различных заболеваний (интоксикации, злокачественных новообразований, хронических заболеваний). Повышенное содержание белка (гиперпротеинемия) бывает редко, это может быть при сгущении крови из-за значительной потери жидкости (длительная рвота, ожоговая болезнь, диарея), при наследственных заболеваниях - парапротеинемиях.

Одним из методов количественного определения суммарного белка сыворотки крови является биуретовый метод, который основан на способности белков, содержащих пептидные связи, образовывать с ионами меди в щелочной среде комплексные соединения фиолетового цвета. Интенсивность окраски пропорциональна содержанию белка в растворе.

Техника выполнения работы.В пробирку налить 0,1 мл исследуемой сыворотки, в другую (контрольную) – 0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия. В обе пробирки добавить по 5,0 мл биуретового реактива (ионы Сu⁺⁺ в щелочной среде). Содержимое обеих пробирок перемешать. Через 30 мин. измерить экстинкцию исследуемого раствора на ФЭКе в кювете толщиной 1 см при длине волны 540-560 нм (зеленый светофильтр) против контрольного раствора.

Содержание белка в сыворотке крови (в г/л) найти по калибровочному графику, который построен с заранее известными концентрациями стандартного белка и выражает зависимость между количеством белка в крови и оптической плотностью (экстинкцией) окрашенного раствора.

Построение калибровочного графика.

Для этого применяют стандартный белок – альбумин сыворотки крови. Из 10% стандартного раствора альбумина в 4 пробирках готовят растворы белка как показано в таблице.

Из каждой пробирки берут по 0,1 мл раствора, добавляют к нему 5,0 мл биуретового реактива. Через 30 мин. измеряют экстинкцию на ФЭКе против контрольного раствора (0,1 мл 0,9% раствора хлорида натрия и 5 мл биуретового реактива).

Полученные значения откладывают на оси ординат, а концентрацию белка (в г/л) на оси абсцисс.

Фотоэлектроколориметр

Для измерения оптической плотности или светопропускания жидких растворов по отношению к растворителю или стандартному раствору предназначен фотоэлектрический колориметр (ФЭК).

В основу работы этого прибора положен принцип уравнения интенсивности двух световых пучков, проходящих через оптические среды, при помощи переменной щелевой диафрагмы.

Световые лучи от лампы, отразившись от зеркал, проходят через светофильтры, кюветы и попадают на фотоэлементы, которые подключены к гальванометру. Так что при равенстве интенсивности падающих на фотоэлементы световых пучков стрелка гальванометра стоит на нуле.

При вращении барабана диафрагма, связанная с ним, меняет свою ширину и тем самым величину светового потока, падающего на фотоэлемент.

Фотометрически нейтральный клин служит для ослабления светового потока, падающего на фотоэлемент.

Способ измерения.

1.В пучок света помещают кюветы с контрольным раствором.

2.Вращением ручки круговых фотометрических клиньев устанавливают стрелку гальванометра на нуль.

3.Затем в пучок света вводится кювета с исследуемым раствором, при этом стрелка гальванометра отклоняется от нулевого положения. Снимается показание.

4.Прибор после окончания работы выключить. Осторожно промыть кюветы.