Волютиновые зёрна. Химический состав. Функции. Способы окраски.

1. Характерны только для дифтерийной палочки.

2. Располагаются по полюсам и интенсивно прокрашиваются (метахромазия).

3. По химическому составу – полифосфаты.

4. Играют диагностическую и трофическую роль.

5. Выявляются простым методом окраска – Окраска метиленовым синим в течение 20-30 секунд (тёмно-синие зёрна на полюсах светло-голубых тел бактерий) и сложным методом – по Нейссеру.

Окраска по Нейссеру: 1. На фиксированный мазок наносят ацетат синьки Нейссера – 2 минуты, промывают водой. 2. Наносят раствор Люголя на 30 секунд и промывают водой. 3. Везувин на 1 минуту, промывают водой, высушивают, микроскопируют.

Результат: зёрна волютина, имеющие щелочную реакцию, воспринимают синьку и окрашиваются в тёмно-синий цвет. Цитоплазма с кислой рН воспринимает везувин и окрашивается в жёлтый цвет.

20. Простые и сложные методы окраски. Механизм окраски по Граму.

Способы окрашивания микробов делятся на простые и сложные, или дифференциальные.

При простой окраске употребляется только один краситель, чаще всего - фуксин Пфейффера (экспозиция 1-2 мин), или синька Леффлера (экспозиция 3-5 мин). Их относят к группе анилиновых красителей. Сложные, или дифференциальные способы окраски бактерий основаны на особенностях физико-химического строения микробной клетки, и применяются для детального изучения структуры клетки, также для дифференциации данного микроба от других. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.

Простые		Сложные (основные)
Метод	Цель	Метод	Цель
Окраска метиленовым синим	Изучение: · формы бактерий · их расположения в мазке	Окраска по Граму (основной метод окраски в бактериологии)	Определение типа строения клеточной стенки
		Окраска по Цилю-Нильсену	Выявление: - кислотоустойчивых бактерий (микобактерий) - спор
		Окраска по Нейссеру	Выявление включений волютина и идентификация по их наличию коринебактерий
Окраска водным фуксином		Окраска по Бурри-Гинсу	Выявление капсул
		Окраска по Морозову	Выявление: · жгутиков · трепонем · вирусов натуральной и ветряной оспы
		Окраска по Здрадовскому	Выявление хламидий
		Окраска по Романовскому-Гимзе	Выявление: · риккетсий · спирохет · простейших

Окраска по Граму (механизм)

Грамхарактеристика основных форм бактерий

n Шарообразные формы бактерий - кокки грамположительны (Гр+), за исключением гонококка, менингококка и катарального микрококка.

n Цилиндрические формы: спорообразующие палочки - бациллы и клостридии – Гр+.

n Неспорообразующие (собственно бактерии) – грамотрицательны (Гр-), за исключением актиномицетной линии бактерий. В последнюю входят: коринебактерии, в т. ч. возбудитель дифтерии; микобактерии – возбудители туберкулёза, микобактериозов и актиномикоза.

n Актиномикотическая друза окрашивается по Граму смешанно: аморфный центр - Гр+, периферия - Гр-.

n Извитые формы: вибрионы, спириллы, спирохеты – Гр-.

n Риккетсии, хламидии - Гр-.

n Микроорганизмы с дефектами или не имеющие КС–Гр-.

Морфология и ультраструктура спирохет. Методы микроскопии.

Систематическое положение спирохет.

Царство.Prokaryotae

Отдел. Gracilicutes

Порядок. Spirochaetales

Семейство 1. Spirochaetaceae

Роды.1.Treponema

      2.Borrelia

 Семейство 2.Leptospiraceae

 Род. 3.Leptospira

Методы выявления спирохет.

- Спирохеты плохо воспринимают красители. Обычно их окрашивают по методу Романовского-Гимзе или серебрением по Морозову, а также применяют негативное окрашивание по методу Бурри; в живом виде их исследуют с помощью фазово-котрастной и темнопольной микроскопии.

Метод Романовского-Гимзе. Краситель состоит из эозина, метиленового синего и азура растворенных в смеси метанола с глицерином. Базофильная зернистость окрашивается в синий цвет, эозинофильная - в красный, а нейтрофильная - в сиреневый цвет.

Техника окраски.

1. Приготовить микроскопический препарат и обработать его в жидком фиксаторе.

2. Поместить фиксированный препарат на два стеклянных валика в чашку Петри вниз ко дну и подливают разведенный в 10-20 раз свежеприготовленный краситель. Окрашивание длится от 30-60 минут до нескольких часов.

3. Мазки промывают водой и высушивают на воздухе.

Актиномицеты. Систематическое положение. Роль в природе. Идентификация.

Систематическое положение актиномицетов.       

Царство. Prokaryotae

Отдел. Firmicutes

Порядок. Actinomycetales

Семейство.Actinomycetaсeae

    Роды.1.Actinomyces

                2. Nocardia

                3. Streptomyces

Актиномицеты -это бактерии, сходные с мицеллярными грибами. С бактериями у них общее строение клетки, с грибами - форма клетки и размножение. Большинство актиномицетов обитают в почве и составляют 20-60% общей микробной популяции. Патогенные представители - Actinomyces israelii, Actinomyces naeslundii вызывают актиномикоз. Стрептомицеты продуцируют антибиотики.

Методы выявления:

1. По Грамму (грамположительны). В пораженных тканях они образуют актиномикотическую друзу, которая представляет собой агрегаты переплетенного мицелия в центре с отдельными, отходящими наподобие лучей гифами с колбовидным утолщением на концах - по периферии. При окраске по Граму центр окрашивается позитивно, а поверхность негативно.

2. Микроскопические препараты из актиномицетов можно окрасить по методу Романовского-Гимзе и по Цилю–Нельсену (некоторые актиномицеты кислотоустойчивы).

3. Актиномицеты хорошо воспринимают анилиновые красители, например, метиленовый синий.

Морфология: представляют собой слабоветвящиеся (актиномицеты) палочки или сильноветвящиеся гифы (стрептомицеты). Стрептомицеты образуют экзоспоры. Пептидогликан содержит сахара, отсутствующие у других прокариот.