Рентгеноанатомические отличия собак и кошек

Нормальная рентгеноанатомия собак и кошек различается по следующим признакам:

1. По форме черепа;
2. По когтевым фалангам;
3. По зонам роста костей (особенно дистальных отделов предплечья и бедра: у кошки — ровные и прямые, у собаки — неровные и клиновидные);
4. У кошки просматривается рудимент ключицы в области плечелопаточного сустава;
5. У кобелей просматривается os. Penis вдоль проекции полового члена (имеется также у самцов хорьков);

В боковой проекции:

1. Локтевой бугор кошки ровный, прямоугольный; у собаки — скошенный;
2. Грудная клетка кошки ровная, треугольная; у собаки — выгнутая;
3. Коленная чашечка у кошки — каплевидной формы, заострена; у собаки — бобовидной формы, незаострённая;
4. Тела поясничных позвонков: у кошки прямоугольные, продолговатые; у собаки относительно квадратные;

В прямой проекции:

1. Таз у кошки ровный, прямоугольный; у собаки — в форме бабочки.

7.ПВ. Разбор ультразвуковых снимков

1. Определяем пороговое значение цвета

2. Выделяем по положению оттенка на шкале цветности аномальных пикселей. Выбираем гипоэхогенные и анаэхогенные области.

3. Выделяем аномальные пиксели пороговым методом, взяв уже размытое изображение.

4. Выделяем круглые объекты.

5. Возвращаемся к исходному изображению и наложим положения опухоли на него.

8. (практический) — исследование мазка крови у собак.

По мазку крови определяют морфологию клеток крови — для выявления патологических изменений в клетках крови, дифференциации отдельных видов лейкоцитов с целью выведения лейкограммы, выявления молодых и атипичных клеток крови. Признаки — размер клеток, форма, соотношение ядро-цитоплазма (тем больше, чем моложе клетка), форма ядра, его хроматиновая структура, цитоплазма, зернистость.

Эритроцитов у собак в норме — 5,2 — 8,4 млн/мкл

Центральная бледная зона легко различима в эритроцитах у собак, менее заметна —у кошек и лошадей. Диаметр эритроцита у собак 5—9 мкм (среднее — 7 мкм). Собаки имеют наибольшие среди всех домашних животных эритроциты (d = 7,0 мкм), наименьшие у кошек (d = 4,3 мкм).

Лейкоцитов — 8,5 — 10,5 тыс./мкл

Лейкограмма в норме: Базофилы 0-1 %

Эозинофилы 3-9 %

Миелоциты 0 %

Юные нейтрофилы 0 %

Сегментоядерные нейтрофилы 1-6 %

Палочкоядерные нейтрофилы 43-71 %

Лимфоциты 21-40 %

Моноциты 1-5 %

Тромбоцитов — 250 — 550 тыс./мкл

Исследование на пироплазмоз:

На чистое, обезжиренное предметное стекло наносят первую каплю периферической крови (лучше из уха) и при помощи шлифованного или покровного стекла делают тонкий средней длины мазок.

Мазки фиксируют в чистом метиловом спирте в течение трех минут или в 95° этиловом — 5—10 минут. Фиксирующую жидкость можно наливать на поверхность мазков в количестве 5—10 капель и оставлять до высыхания.

Окрашивают мазки чаще по методу Романовского в течение 15—60 минут.

Окрашенные мазки рассматривают под иммерсионной системой микроскопа., Пироплазмиды отчетливо видны на розовом фоне эритроцитов в виде округлых и грушевидных включений, протоплазма которых голубого, а ядро — красно-фиолетового цвета.

Мазок крови собаки: эритроциты, пораженные бабезиями.

Исследование мазка крови кошки.

Микроскопия мазка крови – исследование под микроскопом препарата, приготовленного из капли крови.

Выполнение микроскопии мазка крови является опциональной частью общего анализа крови или лейкоцитарной формулы и отдельно не производится.

Для чего используется этот анализ?

§ Чтобы определить нарушения формы и размера, а также изменения количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, различные типы лейкоцитов (включая незрелые формы) и их процентное соотношение.

§ Для диагностики различных заболеваний, которые связаны с нарушениями образования, функции или с избыточным разрушением форменных элементов крови.

§ Чтобы отслеживать образование клеток крови и степень их зрелости при лейкозах, после химио- или лучевой терапии, а также при нарушениях образования гемоглобина.

Когда назначается исследование?

§ Когда по результатам общего анализа крови и лейкоцитарной формулы, назначаемым по самому широкому кругу показаний, выявлено значительное увеличение количества лейкоцитов, атипичные или незрелые клетки.

§ При подозрении на заболевание, влияющее на клетки крови.

§ При приеме лекарств, которые могут влиять на производство клеток крови.

Какой биоматериал можно использовать для анализа?

Венозную или капиллярную кровь.

Общая информация об исследовании

Исследование позволяет морфологически оценить клетки (форменные элементы) крови (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты), а также выполнить их подсчет.

Что означают результаты?

Изменения в мазке крови не всегда позволяют поставить диагноз. Как правило, они указывает на наличие некоего заболевания, что предполагает дальнейшее обследование в целях постановки точного диагноза.

Приготовление мазков крови. Лучше мазки готовить из свежей, нативной крови. Из цитратной и оксалатной крови мазки можно приготовить до 6 ч после взятия ее, а из гепаринизированной — до 24 ч. Мазки крови готовят на предметных стеклах, которые нужно соответствую­щим образом подготовить.

Подготовка предметных стекол. Не бывшие в употреблении стекла промывают в водопро­водной воде, а затем в дистиллированной, высушивают и закладывают в банку с притертой крышкой в смесь равных количеств этилового эфира и этилового спирта. Перед работой стекла извлекают пинцетом, протирают. При необходимости, подгото­вленные таким образом стекла складывают в пакеты, за­вертывают в бумагу и закладывают на хранение в полиэ­тиленовые мешочки, которые хорошо завязывают.

Техника приготовления мазков. Пред­метное стекло берут между большим и указательным пальцами левой руки. Отступя на 1 см от края стекла, лежащего ближе к указательному пальцу, наносят не­большую (диаметром 2 — 3 мм) каплю крови. Это де­лают обычно путем прикосновения поверхностью пред­метного стекла к капле крови на месте ее появления после прокола кожи. При изготовлении мазков из крови, взятой в пробирки, каплю ее наносят с помощью глаз­ной или пастеровской пипетки или краем пробки. Затем правой рукой устанавливают вблизи от капли крови шлифованное стекло под углом 30 — 45° и осторожно продвигают его до соприкосновения края стекла с каплей крови. После этого, плавно и не очень быстро, продвигая, справа, налево шлифованное стекло по пред­метному, приготовляют мазок.

Мазок должен начинаться на 1 — 1,5 см от края предмет­ного стекла и заканчиваться в 1 — 3 см от другого его края, составляя примерно 2/3 — 3/4 длины стекла. Мазок должен быть уже предметного стекла, с боков на стекле должны оста­ваться свободные поля шириной около 1 см. Хоро­ший мазок не имеет перерывов, пустот, на всем протяжении одинаковый по толщине. Хорошие мазки получаются при подогревании пред­метных стекол на резиновой грелке с теплой водой 45 — 50 °С, или на электрообогревательном столике к ми­кроскопу, или на стерилизаторе с горячей водой, закры­том крышкой; рекомендуется на этих же приспособле­ниях высушивать изготовленные мазки.

В холодное время необходимо предупреждать кон­денсацию паров воды на мазках крови, что может вы­звать ее гемолиз.

На высушенном мазке в начальной его части про­стым карандашом или иглой от шприца пишут номер животного (или порядковый номер записи исследуемых животных) и дату взятия крови.

Фиксация мазков. Мазки крови необходимо в течение 2 дней после изготовления или зафиксировать, или окра­сить. Нефиксированные мазки через месяц теряют спо­собность правильно окрашиваться.

Для фиксации мазки погружают в метиловый спирт (5 мин), этиловый спирт (30 мин), этиловый спирт и эти­ловый эфир поровну (30 мин) или денатурированный спирт (30 мин). Мазки помещают в кюветы с фиксато­ром и закрывают крышкой. Мазки не должны соприка­саться. После фиксации мазки высушивают на воздухе.

Окраска мазков. Качество окраски мазков зависит от многих факторов, в том числе и от рН воды, применяе­мой для разведения красок.

Для нейтрализации воды с кислой реакцией по ка­плям добавляют 1 %-ный раствор натрия гидрокарбона­та, пока розово-фиолетовая окраска не начнет появлять­ся в течение 1 — 5 мин. Для нейтрализации щелочной воды добавляют 1 %-ный раствор уксусной кислоты.

Метод Романовского— Гимза. Фиксиро­ванные препараты кладут мазком вниз на стеклянный мостик в кювете и наливают под них рабочий раствор краски (к 1 мл дистиллированной воды добавляют 2 ка­пли фабричного раствора краски Романовского — Гим­за). Окрашивание продолжается 15 — 30 мин. Продолжи­тельность окраски зависит от окружающей температуры (чем холоднее, тем продолжительнее окраска) и качества красителя. В заключение мазки промывают дистиллиро­ванной водой и сушат на воздухе.

Эритроциты:

Оценку состояния эритроцитов проводят под иммерсией (х100) в средней части мазка: в моноцеллюлярном слое, где они хорошо разделены и не деформированы.

•При морфологической оценке выявляют симптомы медуллярной регенерации, а также изменение размера, формы и присутствие включений.

•Нормальные эритроциты у домашних плотоядных представлены округлыми безъядерными клетками в форме двояковогнутого диска (дискоцит), диаметр которого приблизительно равен 6 мкм у кошки. В моноцеллюлярной зоне они представлены моноцеллюлярным слоем, имеют округлую форму с бледным свечением в центре (практически отсутствует у кошки), окрашены в желто-оранжевыйцвет (умеренная эозинофилия). При этом можно наблюдать физиологически умеренный анизоцитоз (называют изменение размеров красных кровяных клеток).

Признаки регенерации:

§ Патогномоничные симптомы регенерации в мазках крови следующие: полихроматофилия; анизоцитоз; тельца Га- вела-Жоли; эритробласты (эритроциты, содержащие ядро), ассоциирующиеся с ретикулоцитозом, наблюдаемым при специальной окраске.

§ Полихроматофилию определяют по наличию в крови эритроцитов большого диаметра фиолетовой окраски с элементами базофилии, которые контрастируют с оранжевым цветом нормальных эритроцитов. Эти полихроматофильные клетки соответствуют незрелым формам эритроцитов, которые широко распространены в костном мозге и визуализируются при дегенеративных изменениях костного мозга. В цитоплазме они содержат остатки рибосомальной РНК, которая придает фиолетовую окраску. Это соответствует у собаки и кошки ретикулоцитам с прижизненной окраской (мерцающий крезиловый голубой).

§ Анизоцитоз - вариации размера эритроцитов. Увеличивается количество эритроцитов большого размера, находящихся в крови. Полихроматофилия связана с большим размером и соответствует анизоцитозу. Присутствие эритроцитов с более интенсивной окраской и большим размером эритроцитов — веский аргумент в пользу регенеративной анемии.

§ Эритробласты (ядерные эритроциты, незрелые формы), обычно находящиеся в костном мозге, имеют тенденцию иногда в малом количестве появляться в циркулирующей крови здорового организма. Они характеризуются большим размером, имеют серовато-фиолетовуюцитоплазму, объемное, круглое, интенсивно окрашенное ядро. Их количество возрастает при регенеративной анемии, но присутствие только этих клеток не позволяет ставить диагноз на предполагаемое заболевание. Эритробласты можно наблюдать в большом количестве в циркулирующей крови при отравлении свинцом, выраженной септицемии, при различных заболеваниях крови (синдром миелопролиферации и т.д.).

§ Для подтверждения регенеративной анемии обязательно требуется вести подсчет циркулирующих в крови ретикулоцитов после окраски голубым бриллиантовым крезилом. При проведении такой окраски различают зрелые формы эритроцитов с голубой интенсивной окраской цитоплазматического ретикулума. У собаки учитываются все клетки с такой окраской, тогда как у кошки подсчитываются только ретикулярные эритробласты (распознаются благодаря выраженному скоплению цитоплазматической грануляции).

Аномалии размера

§ Сфероцитоз - наиболее часто встречаемая аномалия размера эритроцитов. Он свидетельствует об иммунологическом воздействии на эритроциты при развитии гемолитической анемии. Наличие сфероцитов объясняется частичным лизисом макрофагами печени и селезенки эритроцитов, покрытых антителами. Сфероциты распознаются по малому размеру, имеют однородную цитоплазму и интенсивную окраску, у них отсутствует бледное пятно в центре.

Эти клетки труднее идентифицировать у кошки: здоровые эритроциты у этого вида не имеют в центре бледного окрашивания.

При гемолитической анемии, опосредованной иммуноглобулинами, мазки указывают на выраженную концентрацию сфероцитов, что ассоциируется с признаками регенерации костного мозга (присутствие полихроматофилов, телец Гаве- ла-Жолии анизоцитоз).

§ Симптомы медуллярной регенерации с наличием эритроцитов большого (макроциты) или малого (микроциты) размера можно наблюдать в циркулирующей крови. Эти клетки имеют тинкториальные и морфологические свойства нормальных эритроцитов. Значительно сложнее выявить аномалию: необходимо оценить средний объем эритроцитов (VGM) с помощью автоматического счетчика.

Среди причин, вызывающих снижение VGM, могут быть портосистемное шунтирование или арегенеративная анемия, вызванная недостаточностью железа. Аномалия размера является ранним признаком сидеропении (низкого содержания железа). Гипохромазия (пониженное окрашивание) проявляется значительно позже и возникает через несколько месяцев с момента начала заболевания.

Аномалии формы

•Эритроциты собаки и кошки, циркулирующие в крови, обычно имеют округлую форму. Повышенное содержание эритроцитов разных форм называют пойкилоцитозом. Этот неспецифический термин обозначает вариации форм эритроцитов по отношению к физиологической норме без указания природы или тяжести нарушений. Эту аномалию относят к артефакту, или она ассоциируется с множеством системных заболеваний.

• Многие термины, часть из которых предназначена для описания цитологической картины, используют для описания формы аномалий эритроцитов: кодоциты, дакриоциты, кератоциты, стоматоциты и так далее. Наличие отдельных форм является патогномоничным признаком некоторых нарушений и коррелирует с клинической картиной заболевания. При развитии пойкилоцитоза в основном следует искать выраженные расстройства, связанные с воспалительным процессом или патологией гепатобилиарной системы.

• При нарушениях метаболизма эритроциты могут быть деформированы в связи с аномалией их мембраны. Акантоциты — это деформированные эритроциты, удлиненная форма которых напоминает палец. Они образуются при аномалиях мембраны, вызванных нарушением печени (шунтирование, новообразования печени, липопротеинопатия, гиперхолистеролемия).

• Механическая фрагментация эритроцитов при нарушениях гемоциркуляции ведет к образованию шизоцитов: это фрагменты эритроцитов различных размеров, которые могут иметь неправильную форму (точек, серпа и т.д.). Они возникают вследствие турбулентности крови, например, при стенозе клапанов. Также механическая фрагментация эритроцитов может быть вызвана иммунологическими или физическими агрессиями (ДВС, гемангиосаркомой, выраженными воспалениями и т.д.).

Аномалии окраски

Интенсивность окраски эритроцитов пропорциональна концентрации содержащегося в них гемоглобина.

• Гипохромия определяется по наличию бледности в центральной части эритроцита в связи с выраженным снижением содержания гемоглобина. Часто выявляется при сидеропенической анемии. Гемоглобин концентрируется в виде тонкого периферического кольца в эритроцитах, которые называют аннулоцитами.

Большинство подобных анемий связано с недостаточностью железа вследствие хронической потери в системе пищеварения (язвы, разрушающиеся опухоли и т.д.).

•Напротив, некоторую степень гиперхромии (оптической) можно обнаружить при гемолитической анемии по присутствию сфероцитов, униформных эритроцитов при интенсивной их окраске.

Наличие включений

Обычно эритроциты имеют униформную (однородную) окраску без каких-либо включений. Большое количество эритроцитарных включений идентифицировано собаки и кошки, некоторые из них присутствуют в норме.

•Тельца Гейнца проявляются как протуберанции палевого цвета на мембране или внутри эритроцитов, вызваны окислением молекул гемоглобина. Они значительно проще идентифицируются с помощью специальных окрасок (метиленовым синим, голубым бриллиантовым крезилом), но их можно наблюдать при обычной окраске за счет большого размера.

•Присутствие телец Гейнца обычно отмечают у представителей семейства кошачьих в небольшом количестве (менее 3%). Это связано с большим содержанием сульфгидрильных групп на молекуле гемоглобина и объясняет повышенную чувствительность к процессам окисления. При большом количестве телец Гейнца у кошки предполагают в первую очередь отравление токсическими дозами препаратов, вызывающих окисление (парацетамол, потребление лука), а также заболевания, связанные с обменными процессами (диабет, гипертироидоз), или онкологической природы (злокачественная лимфома). При выраженной интоксикации окисленный гемоглобин может конденсироваться в части эритроцитов. Оставшаяся цитоплазма в оптическом поле выглядит опустошенной и образует эксцентроцит. Его морфология схожа с тельцами Гейнца.

•Исследование мазка крови позволяет выявить некоторых возбудителей заболеваний у собаки и кошки. Наиболее часто это гемобартенеллез (Hemobartonella felis) и пироплазмоз (Babesia canis).

•Гемобартенеллы имеют форму небольших кокков или палочек, локализующихся на поверхности мембраны эритроцитов, которые иногда с трудом поддаются дифференциации от артефактов, возникающих при приготовлении мазка крови.

•Пироплазмы характеризуются базофильными включениями в форме груши в цитоплазме эритроцитов. Сдвоенная форма является классической для заболевания, но интраили экстрацеллюлярную персистенцию четырех паразитов также можно наблюдать в мазках.

ИССЛЕДОВАНИЕ ТРОМБОЦИТОВ

•Кровяные пластинки, или тромбоциты, имеют круглую или овальную форму, слабо дифференцируемый контур и зернистость розового цвета. Размер их меньше, чем у эритроцитов.

•Если обнаруживают скопления в мазке крови, то это указывает на артефактную тромбоцитопению при пункции (активация первичного гемостаза, агрегация тромбоцитов в пробирке, что исключает возможность подсчета) или на избыток EDTA.

•Количественное содержание тромбоцитов определяют под объективом с иммерсией. Этот метод исследования используют у кошек. Некоторые автоматы часто совершают ошибки в связи со слабой дифференциацией объема между эритроцитами и тромбоцитами, что является причиной неточного подсчета.

•Присутствие мегатромбоцитов (размер равный, иногда превышающий объем эритроцита) часто связано с ранней, а также вторичной регенерацией тромбоцитов при их деструкции или периферической утилизации. Значительно реже увеличенные в размере тромбоциты могут быть следствием дисплазии костного мозга, где затрагивается мегакариоцитарная линия клеток (при инфекционном заболевании, вызванном вирусом лейкоза у кошек).

•Присутствие микротромбоцитов в мазках крови свидетельствует об их деструкции, опосредованной иммунной реакцией (тромбоцитопеническая пурпура иммунной природы). Эти малые тромбоциты представлены их фрагментами, покрытыми антителами. Они имеют значение, аналогичное сфероцитам, которые выявляют при анемиях иммунной природы.

•Включения в тромбоцитах встречается редко, но их выявляют при инфицировании Ehrlichia platys (вызывает циклическую тромбоцитопению).

ИССЛЕДОВАНИЕ ЛЕЙКОЦИТОВ

•Контроль лейкоцитов осуществляют на первом этапе исследования с помощью автоматизированного подсчета. Данное исследование проводят в косичках мазка при малом увеличении.

•Плотность лейкоцитов в конце мазка и в его центральной части позволяет определить их количество, тогда как дифференцированный подсчет 100 или 200 лейкоцитов позволяет более точно определить лейкоцитарную формулу крови, чем это можно сделать в настоящее время с помощью большинства используемых для этой цели автоматов. Качественная оценка при визуальном исследовании требует квалификации исследователя. Количество форменных элементов и лейкоцитарная формула, просчитываемые в мазках крови, должны соответствовать результатам автоматического исследования.

•Подсчет формулы или обследование линий формирующихся лейкоцитов позволяет распознать аномальные или бластные клетки в циркулирующей крови при злокачественных гемопатиях. Используемые в настоящее время автоматы, относящиеся к типу Coulter, не позволяют дифференцировать нормальные лейкоциты от аномальных. Эти клетки подсчитываются как нормальные лейкоциты, и их наличие может оказаться вне поля зрения клинициста.

• Далее морфологический анализ выполняют при более сильном увеличении (х 40 или х 100) в зоне мазка с моноцеллюлярным слоем там, где хорошо просматривается морфология клеток. Определяют нейтрофильные гранулоциты (полинуклеарные нейтрофилы, PNN). Лимфоциты и моноциты представлены в достаточно большом количестве в циркулирующей крови, что позволяет провести морфологический анализ. У домашних плотоядных формула крови имеет нейтрофильный профиль (У животных с нейтрофильным профилем лейкограммы лимфоциты составляют 20...40 %). У молодых особей могут преобладать лимфоциты (наблюдается в возрасте до одного года).

•Наиболее частые модификации связаны с изменением морфологии полинуклеарных нейтрофилов при системных воспалительных процессах или клеточной патологии (в случае сепсиса, эндотоксимии или выраженного некроза). В таком случае мы говорим о токсической полинуклеарной нейтрофилии. Первый этап указывает на умеренную токсичность и определяется путем обнаружения телец Дойла: сероватые неравномерные включения в цитоплазме, которые вызваны агрегацией цитоплазматического ретикулума. Эти трудно обнаруживаемые цитоплазматические включения являются наиболее ранним индикатором. Диффузная базофилия цитоплазмы проявляется в более тяжелых случаях. При повышенной токсичности наблюдается два перечисленных признака: микровакуолизация цитоплазмы, имеющей картину пены («мыльные пузыри»). В критических случаях отмечают клеточный гигантизм. Полный лизис ядерного аппарата дополняет картину.

•Гиперсегментация ядра (правостороннее отклонение ядра или кривой Арнета) без признаков токсичности часто является морфологическим изменением в популяции нейтрофилов. Это состояние определяют в популяции нейтрофильных полинуклеаров по выраженной сегментации ядра (больше 5 долей), что в основном свидетельствует о старении клеток крови. Увеличение контакта с ЭДТА (длительное консервирование крови перед выполнением мазка), кортикостероидная терапия со снижением циркуляции в тканях, хроническое воспаление — причины не физиологического увеличения гиперсегментации полинуклеарных нейтрофилов.

• Для стадии неполного созревания, или «band form» (фото 20), характерна неполная сегментация ядер, имеющих форму подковы лошади или земляного ореха (арахиса). Наличие этой несовершенной стадии клеток в большом количестве ассоциируется с нейтрофилией (отклонение ядра или кривой Арнета влево). Указывает на увеличение гранулопоэза, часто вследствие роста фагоцитоза в периферической ткани, например, при остром гнойном воспалении.

• Другие группы лейкоцитов также могут изменяться, что имеет следующее объяснение: лимфоциты не проявляют признаков токсичности, но реагируют при стимуляции антигеном инфекционного агента, а также при иммунном или неопластическом процессе. Эти реактивные лимфоциты, или «иммуноциты» характеризуются увеличенным размером и выраженной базофилией. Другие модификации, например азурофильные цитоплазматические включения, также могут быть обнаружены в лимфоцитах, которые называют «зернистыми лимфоцитами». Их наблюдают в циркулирующей крови при неспецифической стимуляции иммунной системы (вирусные заболевания, недавно проведенная вакцинация), а также в случае новообразований и некоторых хронических нарушений (эрлихиоз). Эти активированные клетки относятся NK (естественным киллерам).

•Лейкоцитарные включения встречаются крайне редко.

•Наличие эритрофагоцитов (моноциты, которые фагоцитируют эритроциты) можно наблюдать при гемолизе иммунной экстрацеллюлярной природы, например при бабезиозе (пироплазмоз).