Культивирование аэробных микроорганизмов в условиях лаборатории. Методы выделения чистой культуры аэробных микроорганизмов

Микроорганизмы, выращенные на искусственных питательной  среды – микробными культурами, а получение их роста на питательной среде-культивированием. Для культивирования необходимы условия: оптимальный температурный режим с учетом, к какой группе относится исследуемый вид бактерий, соответствующие питательной среды, аэробиоз (или анаэробиоз). Для обеспечения постоянной оптимальной температуры служат термостаты. Лабораторный термостат- шкаф с двойными стенками, снаружи облицованный материалом непроводником тепла (пластик), внутренняя стенка металлическая. Между двумя металлическими стенками находится вода (или воздух), подогреваемая электричеством. От нагретой воды через внутреннюю металлическую стенку тепло поступает в термостат. Внутри имеются сетчатые полочки, на которых размещают штативы с пробирками, чашки Петри и др. Постоянная температура поддерживается при помощи терморегуляторов - при достижении температуры заданного уровня автоматически происходит отключение прибора; при снижении температуры термостат вновь включается автоматически. Помимо обеспечения температурного режима, следует учитывать тип дыхания микроорганизмов: при аэробном типе дыхания никаких дополнительных условий создавать не нужно. Выделение из смеси одного вида микроба – выделение чистой культуры. Один из первых методов предложил Пастер – метод разведения. Исследуемый материал последовательно разводят в жидкой питательной  среде: берут ряд пробирок с МПБ, исследуемый материал вносят в первую пробирку, перемешивают, из неё переносят во вторую и т.д. Пастер предполагал, что в последней пробирке возможен рост одного вида микроба. Но это не так. Метод Коха – применяется плотная среда – используя принцип Пастера, исследуемый материал разводят в 4-5 пробирках с расплавленным и остужённым МПА, осторожно содержимое пробирки выливают в чашку Петри и распределяют среду тонким слоем, чашку закрывают, и когда А остынет переворачивают вверх дном. Ставят в термостат. Там где концентрация микробов меньше вырастают изолированные друг от друга колонии. С обратной стороны отмечают нужную колонию, делают посевы на МПБ и МПА и вырастает чистая культура. Метод Дригальского – метод пластинчатого посева берут 4-5 чашек Петри. Агаровую среду расплавляют в колбе, разливают в чашки и ставят в термостат вверх дном. Шпателем Дригальского или пастеровской пипеткой равномерно растирают на поверхности среды каплю. Этим же шпателем растирают на поверхности второй чашки и т.д. Помещают в термостат вверх дном. Нужную культуру засевают в МПА и МПБ. Биологический метод – исследуемый материал вводят восприимчивому лабораторному животному. При наличии патогенного микроба животные гибнут, их вскрывают и делают посевы. Метод Шукевича – подвижный микроб переходит на поверхность. А из конденсационной жидкости, из верхнего края выросшей культуры делают посевы и получают чистую культуру. Химический метод – к питательной  среде добавляют химические вещества, который действуют на одних убийственно, у других задерживается рост, а третьи не восприимчивы. 

Химический состав бактериальной клетки

75-85% вода, 25-15% - сухой остаток. Ведущая роль принадлежит 4 основного элемента, который получил название органогены: кислород – 30% сухого остатка, Н – 6-8%, С-45-55%, N-8-15%. Вода в клетке может быть в 2 состояниях: свободная вода, которые является растворителем для кристаллических веществ и в ней происходит движение ионов; связанная вода, кот входит в состав белков, жиров и углеводов. В бактериологической клетке на долю белков – 60-70%, углеводы – 20%, липиды -1-2%. Повышенное содержание липидов придаёт клетке кислотно-спирто-щелочеустойчивость. Белки – высокомолекулярные полимерные соединения, образующиеся при гидролизе аминокислоты – сложные – протеиды, простые - протеины. Функции белков – гл структурный материал для всех клеточной мембран, они обеспечив двигательный функции, транспорт питательных веществ через мембрану. Углеводы – многоатомные спирты (манит, дульцит) и полисахариды (гликоген). Играют энергетическую роль в клетке. Липиды – жирные к-ты и нейтральные жиры, фосфолипиды цитоплазматической мембраны. Является резервом клетки, использование как исходного компонент для синтеза белка. Минеральные вещест-ва – 3-10% сухого остатка. Микро и макроэлементы. Микробные ф-ты. Главные свойства: специфичность и термолябильность. У микроорганизмов набор ф-тов генетически закреплён и передаётся по наследству. Различ ф-ты: 1. экзоф-ты – выделенный клетки  во внешную среду и катализир разложен сложных в-в субстрата до более простых. 2. эндоф-ты – локализуются в самой кл и участвует во внутриклеточн процессах обмена в-в. 3. конститутивные – является постоянным  компонентом клетки и могут быть обнаружены даже при отсутствии в среде субстрата, которые  они катализируют. 4. адаптивные – вырабатываются в  клетке только тогда, когда в среде появляется соотвествующий субстрат. Различают: оксиредуктазу, трансферазу, гидролазу, лиазу, изомеразу, лигазу и киназу. Наличие ф-тов можно обнаружить с помощью специальной среды.