Тема 1.Санитарно-микробиологическая лаборатория и ее оборудование.Техника безопасности и режим работы.

Санитарно-микробиологическое исследование

Объектов внешней среды

   Санитарно-микробиологическая лаборатория состоит из нескольких помещений: комнаты для бактериологических исследований; лаборатории для приготовления и розлива питательных сред; автоклавной, в которой проводится стерилизация питательных сред и обеззараживание отработанных бактериальных культур и посуды (автоклавы должны быть раздельные и маркированные); моечной– для мытья лабораторной посуды; складских помещений для хранения посуды, сухих питательных сред и реактивов. Регистратура для приема исследуемого материала (анализов), кабинет для заведующего. Виварий для содержания лабораторных животных строят отдельно или помещают в подвальном этаже.

    Лабораторные комнаты для проведения бактериологических исследований должны быть просторные – на каждое рабочее место должно приходиться 7,5 м². В комнате выделяется площадь для одного или двух застекленных до потолка боксов с предбоксниками, в которых ведется работа, требующая асептических условий, где исключено движение воздуха. В боксах для обеззараживания воздуха УФ–лучами применяются специальные бактерицидные лампы, из расчета 1,5-2,5 Вт на 1 м³ бокса. Стены, пол и потолок должны быть облицованы плиткой устойчивой к влажной обработке дезраствором. Лабораторные столы должны быть покрыты пластиком, чтобы их можно было обрабатывать дезинфицирующими растворами. В боксе за 30 мин до начала и после окончания работы включают бактерицидные лампы. На каждом рабочем месте бактериолога должны быть: бактериальная петля, спиртовки, штатив для пробирок, предметные и покровные стекла, карандаши по стеклу, набор красок, сливная чаша с мостиком, иммерсионное масло, микроскоп с иммерсионным объективом, банки с дезраствором, набор пастеровских и градуированных стерильных пипеток.

    П р а в и л а и р е ж и м р а б о т ы. В санитарно-микробиологических лабораториях соблюдается такой же режим работы, как и в других микробиологических лабораториях, где работают с инфицированным материалом. С поступившим исследуемым материалом следует работать как с потенциальным источником опасности для здоровья человека. Поэтому все сотрудники должны соблюдать правила, обеспечивающие стерильность в работе, исключающие возможность внутри лабораторного заражения и распространения патогенных бактерий за пределы лаборатории. В связи с этим приняты следующие правила:

1.Вся лабораторная работа должна проводиться в спецодежде (халат, шапочка). Спецодежду вне лаборатории не носить.

2.Запрещается входить в лабораторию без халата, выходить в нем за пределы лаборатории и надевать на халат верхнюю одежду.

3. Двери лаборатории должны быть закрыты.

4.В помещении лаборатории запрещается хранить посторонние вещи, принимать пищу, курить.

5. Все манипуляции (обработка материала, посевы, вскрытие ампул, фильтрование, центрифугирование) необходимо выполнять осторожно, не допуская образования летучих аэрозолей.

6.Запрещается насасывание исследуемого материала ртом, необходимо пользоваться специальными приспособлениями, исключающими попадание исследуемого материала и микробов в рот.

7. По окончании работы сотрудники должны убрать рабочее место, провести дезинфекцию поверхности стола. Отработанный материал и загрязненную посуду убирают в контейнер для автоклавирования. Остатки стеклянной посуды захватывают пинцетом и погружают в дезраствор. Пробирки и чашки с посевами помещают в термостат. Руки по окончании работы дезинфицируют и моют с мылом.

8. В случае аварии в лаборатории, проводят дезинфекцию.

9. В лаборатории ежедневно проводят влажную уборку с применением дезинфицирующих растворов.

Санитарно-микробиологическое

Исследование воздуха

Цель занятия.Ознакомить студентов с микрофлорой воздуха, источниками ее загрязнения патогенной микрофлорой. Студенты должны овладеть методами бактериологического исследования воздуха - методами Коха и Кротова.

Материальное оснащение.Для исследования воздуха: аппарат Кротова, чашки Петри с МПА и средой Чапека, спирт для обработки внутренней поверхности аппарата Кротова.

       Воздух является неблагоприятной средой для размножения микроорганизмов. Отсутствие питательных веществ, солнечные лучи и высушивание обусловливают быструю гибель микроорганизмов в воздухе, поэтому микрофлора воздуха не так обильна, как микрофлора почвы и воды. 

Состав микрофлоры воздуха очень разнообразен, там встречаются пигментные сапрофитные бактерии (микрококки, сарцины), споровые палочки, плесневые грибы и дрожжи. Доказано что в 1 м³ воздуха животноводческих помещений находится до 2 млн. микробов, в том числе и патогенных. Патогенные микроорганизмы попадают в воздух при кашле, отфыркивании и чихании. При этом капли аэрозоли, находящиеся в воздухе, служат источником аэрогенного заражения окружающих. Скорость оседания капель зависит от диаметра аэрозоля.

Бактериальные аэрозоли делят на три фазы. 1. Крупнокапельная фаза с диаметром частиц аэрозоля более 0,1 мм; длительность пребывания таких частиц в воздухе – несколько секунд, капли быстро оседают. 2. Капельно-ядерная фаза, имеющая диаметр частиц 0,1 мм и менее. Частицы длительно находятся в воздухе и рассеиваются на большие расстояния с потоками воздуха. С ней рассеиваются различные микроорганизмы, в том числе и патогенные. 3. Фаза бактериальной пыли имеет частицы разного диаметра от 1 мм до 0,001 мм. Эта фаза имеет наибольшее эпизоотологическое и эпидемиологическое значение, т.к. она длительно находится во взвешенном состоянии и глубоко проникает в дыхательные пути. Аэрогенным путем инфекционные заболевания передаются, главным образом, в закрытых помещениях.

Санитарно-бактериологическое исследование воздуха проводят для определения количества МАФАнМ (мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов) в 1 м³ и качественного состава (наличие санитарно-показательных и патогенных микроорганизмов). МАФАнМ в воздухе определяют посевом на поверхность МПА, а количество санитарно-показательных микробов (стафилококков и стрептококков) определяют посевом на кровяной и желточно-солевой агар. Для определения наличия плесневых грибов и дрожжей применяют среды Сабуро и Чапека.

Существует много методов бактериологического исследования воздуха. Самыми доступными и чаще применяемыми являются методы Коха и Кротова.

Седиментационный метод Коха.Сутьметода заключается в осаждении микробных частиц и капель аэрозоли на поверхность плотной питательной среды под действием силы тяжести.

 Методика: чашки Петри с МПА и средой Сабуро оставляют открытыми на 5-20 мин в классе, в цехах молочного завода, мясокомбината (время экспозиции зависит от предполагаемой загрязненности). Чашки закрывают и помещают в термостат при 30⁰С, если это МПА или кровяной агар, их культивируют в течение 48 часов; если это среда Сабуро – культивирование проводят при 25⁰С в течение 4-7 суток. Затем проводят подсчет выросших колоний бактерий и плесневых грибов во всей чашке.

После подсчета выросших колоний в чашке Петри, определяют количество микроорганизмов в 1 м³ воздуха по формуле Омелянского, согласно которой предполагается (т.е. это не точный метод), что в чашки с питательной средой площадью 100 см², в течение 5 мин оседает столько микробных клеток, сколько их содержится в 10 л воздуха. Для определения количества бактерий в 1м³ воздуха применяют формулу Омелянского:

       А . 100 . 1000 . 5

       Х =   --------------------

             в . 10 . Т

где Х – количество микробов в 1 м³ (1000 л) воздуха;

       А – число колоний выросших на МПА в чашках;

       в – площадь чашки (78 см²);

       5 – время экспозиции по правилу Омелянского;

       Т – время, в течение которого чашка была открыта;

      10 –10 л воздуха по правилу Омелянского; 

  1000 – 1 м³ воздуха;

    100 - 100 см² питательной среды.                                   

       Аспирационный метод микробиологического исследования воздуха с применением прибора Кротова основан на использовании ударного действия воздушной струи, протянутой через щель прибора, на поверхность МПА в чашках Петри. Этот метод является более точным, т.к. прибор снабжен микроманометром (или ротаметром), показывающим количество литров посеянного воздуха. Аппарат Кротова – это цилиндрический прибор, внутрикоторого имеется электромотор с центробежным вентилятором. При вращении вентилятора воздух засасывается из исследуемого помещения через узкую клиновидную щель в крышке прибора. Под крышкой прибора находится вращающаяся платформа с открытой чашкой Петри, струя воздуха ударяется о поверхность питательной среды, на которую оседают микроорганизмы из воздуха. Чашки с посевами помещают в термостат на 24-48 ч при 30⁰С, затем подсчитывают количество колоний в чашке и по формуле определяют число микробов в 1м³ воздуха исследуемого помещения:

                                           а . 1000      

                                 Х = -----------   

                                                в

       где Х – число микробов в 1 м³ (1000 л) воздуха;

              а - число колоний, выросших на МПА в чашках;

             1000 л = 1 м³ воздуха;

              в - количество литров воздуха, пропущенного через щель прибора. 

                                                                                     Таблица 1