Студопедия

КАТЕГОРИИ:

АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция

Принципы классификации инфекционных заболеваний и их отличительные черты.




Инфекционное заболевание-крайняя степень проявления инфекционного процесса, когда образуется патологический очаг и появляется специфическая клиническая симптоматика. Т.е. инфекционная болезнь и инфекция-это разные вещи.
Классификация инфекционных заболеваний:
1) По природе патогена(по этиологии):
-бактериальные инфекции(дизентерия, сальмонеллез, дифтерия, туберкулез, гонорея)
-вирусные(ВИЧ, грипп, оспа, энцефалит, бешенство)
-грибковые(кандидоз, аспергиллез, трихофития)
-протозойные(малярия, токсоплазмоз, лямблиоз)
-прионные(куру, скрепи, болезнь Крейтцфельда-Якоба)
2)По происхождению
-экзогенная инфекция. Обязательно наличие трех компонентов: источник инфекции, механизм передачи патогена, восприимчивый организм.
-эндогенная инфекция(оппортунистическая). Бывает при снижении иммунитета.(например, фурункул носа стафилококковой этиологии( Staphylococcusepidermidis) при переохлаждении организма). Или при переходе микроорганизма из одного биотопа человека в другой(пример-эшерихиозный цистит, когда Escherichiacoliпопадает из кишечника в мочевой пузырь).
3)По локализации патогена в организме
-местная(очаговая) инфекция. Пример-ангина, когда Streptococcuspyogenesнаходится на слизистой миндалин.
-генерализованная. Микроорганизм должен преодолеть защитные барьеры(лимфоидную ткань, ГЭБ и т.д. Часто транспортируется микроорганизм по крови, откуда выделяют бактериемию(или вирусемию), когда патоген распространяется в крови, но не размножается в ней; сепсис, когда бактерии размножаются в крови; и септикопиемию, когда патоген размножается во внутренних органах=>в них образуются гнойные очаги воспаления.
4)В зависимости от числа проникших в организм патогенов и динамики их действия
-моноинфекция. Когда патоген одного вида. Например, туберкулез, дифтерия.
-смешанная инфекция. Одновременное заражение двумя и более видами возбудителей. Например, ВИЧ и гепатит В при заражении через шприц у наркоманов; сифилис, гонорея и хламидиоз при половом заражении.
-реинфекция. Повторное заражение тем же микроорганизмом после выздоровления. Пример: гонорея, сифилис, дизентерия.
-суперинфекция. Повторное заражение тем же микроорганизмом до выздоровления. Пример: сифилис.
-вторичная инфекция. На фоне развившегося первичного заболевания, вызывается другим возбудителем. Часто эндогенная.
5)По длительности течения
-острые(грипп, корь, чума, холера)
-хронические(туберкулез, сифилис, бруцеллез)
6)По особенностям эпидемиологии
-эпидемическая инфекция. Ею охвачено население больших территорий(1 или нескольких стран). Например, грипп, холера.
-эндемическая инфекция. В определенной географической местности, где возбудитель циркулирует между определенными вилами животных данной местности. Например, чума, бруцеллез, туляремия.
7)По источнику заражения.
-антропонозные. ВИЧ, сифилис.
-зоонозные. Бешенство, сибирская язва, бруцеллез.
-сапронозные. Источник заражения-объекты внешней среды(почва, вода). Например, столбняк, газовая гангрена, лептоспирозы и тд.

41. Природная и приобретенная устойчивость к антибактериальным препаратам.
Бактерии являются резистентными, если они не обезвреживаются такими концентрациями препарата, которые реально создаются в макроорганизме.
1)Природная устойчивость-это генетически обусловленное отсутствие чувствительности микроорганизма к АМП. При этом точки приложения действия препарата в микробной клетке либо отсутствуют, либо недоступны для него. Примером ее может служить резистентность микоплазм и псевдомонад к бензилпенициллину или бактерий к антигрибковым препаратам. Природная устойчивость хорошо прогнозируется и не требует рутинного лабораторного подтверждения.

2)Приобретенная устойчивость-способность отдельных штаммов микроорганизмов выживать при концентрациях антибиотиках, способных ингибировать основную часть микробной популяции данного вида. То есть здесь основной механизм-не отсутствие, а изменение мишени в результате мутаций, модификаций, рекомбинаций. Обусловлена эта устойчивость изменением генома микробной клетки в результате мутаций или связана с получением новой генетической информации в результате конъюгации (передача генетического материала в результате полового процесса у микроорганизмов), трансдукции (передача генетического материала с помощью фагов) или трансформации (непосредственная передача фрагмента ДНК донора реципиентной клетке) с последующей селекцией устойчивых штаммов возбудителей. Этот термин применяют в том случае, когда в чувствительной к определенному химиопрепарату популяции микроорганизмов обнаруживают устойчивые штаммы.
Основным типом приобретенной резистентности является плазмидный. Плазмиды (кольцевые двухцепочечные молекулы ДНК) содержат гены, определяющие устойчивость к одному или нескольким АМП. Плазмиды могут легко передаваться микроорганизмам разных видов, родов и даже семейств посредством трансформации, трансдукции и конъюгации. Легкость передачи плазмид лежит в основе эпидемического распространения антибиотикорезистентности в условиях лечебного учреждения.Хромосомный тип приобретенной резистентности обусловлен спонтанными мутациями в генах, контролирующих чувствительность к определенному АМП. Спонтанные мутации в микробных популяциях встречаются достаточно редко (с частотой 10-6 – 10-13), поэтому хромосомный тип устойчивости имеет в клинике гораздо меньшее значение, чем плазмидный. АМП играют роль селективных агентов, под действием которых происходит элиминация чувствительных микробных клеток и накопление резистентных.
Можно посмотреть вопрос 22, там механизмы.

42. Противогрибковые препараты.
В последние десятилетия в медицине обширно используются антибиотики широкого спектра действия, иммуннодепресанты и токсические химиопрепараты. Применение таких препаратов, наряду с ростом заболеваний приводящих к снижению иммунитета (ВИЧ-инфекция, распространенный туберкулез легких и внелегочной туберкулез, генерализованные инфекции, онкологические заболевания и др.), привело к значительному росту грибковых заболеваний.

Противогрибковые препараты — это лекарственные средства, которые обладают фунгицидным (уничтожение грибкового возбудителя) и фунгистатическим (подавление размножения грибкового возбудителя) действием и применяются для профилактики и лечения грибковых заболеваний (микозов).

Противогрибковые средства различаются по следующим параметрам:

— По происхождению противогрибковых препаратов: природные или синтетические

— По спектру и механизму действия

— По противогрибковому эффекту: фунгицидные и фунгистатические

— По показаниям к применению: для лечения местных или системных грибковых заболеваний

— По способу приема: для приема внутрь, для парентерального введения, для наружного применения

По химической структуре противогрибковые препараты подразделяются:
1. Противогрибковые препараты из группы полиеновых антибиотиков: нистатин, леворин, натамицин, амфотерицин В, микогептин.
2. Противогрибковые препараты из группы производных имидазола: миконазол, кетоконазол, изоконазол, клотримазол, эконазол, бифоназол, оксиконазол, бутоконазол.
3. Противогрибковые препараты из группы производных триазола: флуконазол, итраконазол, вориконазол.
4. Противогрибковые препараты из группы аллиламинов (производные N-метилнафталина): тербинафин, нафтифин.
5. Эхинокандины: каспофунгин.
6. Препараты других групп: гризеофульвин, аморолфин, циклопирокс, флуцитозин.

Классификация противогрибковых препаратов по показаниям к применению
1. Средства, применяемые при лечении заболеваний, вызванных патогенными грибами:
— При системных или глубоких микозах (кокцидиоидомикоз, паракокцидиомикоз, гистоплазмоз(Histoplasmacapsulatum), криптококкоз(Cryptococcusneoformans), бластомикоз): амфотерицин В, микогептин, миконазол, кетоконазол, итраконазол, флуконазол.
— При эпидермомикозах (дерматомикозах): гризеофульвин, тербинафин, хлорнитрофенол, раствор йода спиртовой, калия йодид.
2. Средства, применяемые при лечении заболеваний, вызванных условно-патогенными грибами (например при кандидамикозе): нистатин, леворин, амфотерицин В, миконазол, клотримазол, деквалиния хлорид.

Полный перечень противогрибковых препаратов по международным и торговым наименованиям:
— Амфотерицин В (Амфоглюкамин, Амфолип, Амфоцил, Фунгизон)

— АСД фракция 3

— Аморалфин (Лоцерил)

— Бифоназол (Бифосин, Микоспор)

— Бутоконазол (Гинофорт)

— Вориконазол (Вифенд)

— Гризеофульвин (Фульцин)

— Изоконазол (Гино-Травоген, Травоген)

— Итраконазол (Ирунин, Итразол, Итраконазол, Итрамикол, Кандитрал, Миконихол, Орунгал, Орунгамин, Орунит, Текназол)

— Клотримазол (Амиклон, Антифунгол, Гине-Лотримин, Имидил, Йенамазол, Кандибене, Кандид, Кандид-В6, Кандизол, Канестен, Канизон, Кломегель, Лотримин, Фактодин)

— Каспофунгин (Кансидас)

— Кетоконазол (Кето-Плюс, Кетоконазол-Альтфарм, Ливарол, Микозорал, Микокет, Низорал, Ороназол, Перхотал, Румикоз, Себозол, Фунгинок, Фунгистаб)

— Леворин (Леворидон)

— Микозидин

— Миконазол (Гинезол 7, Гино-Дактанол, Гино-Дактарин, Дактанол, Дактарин, Клион-Д 100, Микозон, Нео-Пенотран)

— Микафунгин (Микамин)

— Натамицин (Пимафуцин)

— Нафтифин (Экзодерил)

— Нистатин

— Оксиконазол (Мифунгар)

— Омоконазол (Микогал)

— Позаконазол (Ноксафил)

— Сертаканазол (Залаин)

— Сангвинарина гидросульфат + Хемритрина гидросульфат (Сангвиритрин)

— Сафоцид

— Тербинафин (Атифин, Бинафин, Ламизил, Ламикан, Ламитель, Миконорм, Микотербин, Онихон, Тербизед, Тербизил, Тербикс, Тербинокс, Тербифин, Термикон, Фунготербин, Цидокан, Экзитер, Экзифин)

— Тиоконазол (Гино-Трозид, Трозид)

— Ундециленовая кислота (Микосептин)

— Фентиконазол (Ломексин)

— Флуконазол (Дифлазон, Дифлюзол, Дифлюкан, Медофлюкон, Микомакс, Микосист, Микофлюкан, Нофунг, Проканазол, Флукозан, Флукозид, Флукомабол, Флукомицид, Флуконорм, Флукорал, Флюкостат, Форкан, Фунголон, Цискан)

— Флуцитозин (Анкотил, Анмарин)

— Фукорцин

— Хлорнитрофенол (Нитрофунгин)

— Циклопирокс (Батрафен, Дафнеджин)

— Эконазол (Ифенек, Гино-Поварил, Экалин, Экодакс)

43. Различия в строении микроорганизмов прокариот и эукариот.
Эукариоты имеют истинное ядро. Оно содержит преобладающую часть генома эукариотической клетки. Геном в основном представлен набором хромосом, которые в ходе митоза удваиваются и распределяются между дочерними клетками. В хромосо­мах ДНК находится в связи с гистонами. В эукариотической клетке имеются и другие органеллы, содержащие ДНК,-митохондрии, но в этих органеллах находится лишь очень малая часть клеточного генома, которая представлена молекулами ДНК, зам­кнутыми в кольцо. Рибосомы в эукариотической клетке более крупные (80S), чем у прокариот.

Прокариоты не имеют окруженного мембраной ядра. ДНК в виде замкнутой в кольцо молекулы свободно располагается в цитоплазме. Эта «бактериальная хромосома» содержит всю необходимую для раз­множения клетки информацию. Кроме того, в прокариотической клетке могут содержаться очень небольшие кольцевые молекулы ДНК-плазмиды; без них, однако, клетка может обойтись. Прокариотическая клет­ка органелл не содержит; подразделение клетки на компартменты менее выражено, чем у эукариот. Рибосомы меньше (70S). У прокариот рибо­сомы, ферменты белкового синтеза и состав клеточной стенки имеют ряд особенностей, благодаря которым на клетку могут специфически воздействовать многие антибиотики.

Прокариоты морфологически относительно слабо дифференциро­ваны, поэтому среди них можно различить лишь ограниченное число форм. В основном это либо сферические формы, либо прямые и изог­нутые палочки. С таким внешним «единообразием» удивительно кон­трастирует чрезвычайное многообразие и пластичность метаболических процессов. В то время как эукариоты нуждаются в молеку­лярном кислороде, многие группы прокариот способны жить без досту­па воздуха (в анаэробных условиях), получая необходимую для роста энергию в результате брожения или анаэробного дыхания. Другие группы прокариот обладают способностью использовать энергию света и строят нужные им вещества либо из органических соединений, либо из углекислоты (двуокиси углерода). Некоторые бактерии могут полу­чать энергию путем окисления различных неорганических соединений или элементов. Среди бактерий широко распространена также способ­ность к фиксации молекулярного азота.

44. Реакция агглютинации. Компоненты, механизм, способы постановки. Применение.
Это иммунодиагностическая реакция. Это иммунная реакция взаимодействия антигена с антителами в присутствии электролитов, причем АГ находится в корпускулярном состоянии (эритроциты, бактерии, частицы латекса с адсорбированными антигенами). При агглютинации корпускулярные антигены склеиваются с антителами и образуется хлопьевидный осадок за счет того, что антитела имеют два активных центра, а антигены поливалентны(имеют несколько антигенных детерминант).
Применяют для идентификации возбудителя, выделенного из материала больного, и дли обнаружения в сыворотке крови больного антител к возбудителю(например, реакции Райта и Хеддлсона при бруцеллезе, реакция Видаля при брюшном тифе и паратифах).

РА используют для: определения возбудителя, выделенного от больного животного; Определения антител в сыворотке крови больного животного
Определение возбудителя:
1)Реакция на стекле(для определения возбудителя): на предметное стекло наносят диагностическую агглютинирующую сыворотку(разведение 1:20 или 1:10), затем вносят культуру от больного. Появился осадок в капле=>реакция положительная. Рядом ставят контроль:вместо сыворотки наносят каплю раствора NaCl.

2) Развернутая реакция агглютинации с возбудителем, выделенным от больного животного. К разведениям агглютинирующей сыворотки добавляют взвесь бактерий, выделенных от больного.

Определение антител в сыворотке крови:
1)Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови. К разведениям сыворотки добавляют диагностикум.

а)Агглютинация с О-диагностикумом (бактерии, убитые нагреванием, сохранившие O- антиген) происходит в виде мелкозернистой агглютинации.
б)Агглютинация с Н - диагностикумом (бактерии, убитые формалином,сохранившие жгутиковый Н-антиген) - крупнохлопчатая и протекает быстрее.


45. Реакция иммунофлюоресценции. Механизм, типы, компоненты, применение для индикации антигенов и серодиагностики.
При данном методе используют явление люминесценции.
Сущность явления люминесценции заключается в том, что при поглощении различных видов энергии (световой, электрической и др.) молекулами некоторых веществ их атомы переходят в возбужденное состояние, а затем, возвращаясь в исходное состояние, выделяют поглощенную энергию в виде светового излучения.

В РИФ люминесценция проявляется в виде флуоресценции — это свечение, возникающее в момент облучения возбуждающим светом и прекращающееся сразу после его окончания.

Многие вещества и живые микроорганизмы обладают собственной флуоресценцией (так называемой первичной), однако интенсивность ее очень мала. Вещества, обладающие интенсивной первичной флуоресценцией и используемые для придания флуоресцирующих свойств нефлуоресцирующим веществам, получили название флуорохромы. Такая наведенная флуоресценция называется вторичной.

Для возбуждения флуоресценции при люминесцентной микроскопии чаще всего используют ультрафиолетовую или сине-фиолетовую часть спектра (длина волны 300—460 нм). Для этих целей в лабораториях имеются люминесцентные микроскопы различных моделей — МЛ-1—МЛ-4, «Люмам».

В вирусологической практике применяют два основных метода люминесцентной микроскопии: флуорохромирования и флуоресцирующих антител (или РИФ).

Флуорохромирование — это обработка препаратов флуорохромом с целью увеличения силы и контрастности свечения их. Наибольший интерес представляет флуорохром акридиновый оранжевый, который вызывает полихроматическую флуоресценцию нуклеиновых кислот. Так, при обработке препаратов этим флуорохромом дезоксирибонуклеиновая кислота ярко флуоресцирует зеленым цветом, а рибонуклеиновая — рубиново-красным.

Метод РИФ заключается в том, что антитела, соединенные с флуорохромом, сохраняют способность вступать в специфическую связь с гомологичным антигеном. Образующийся комплекс антиген + антитело в связи с присутствием в нем флуорохрома обнаруживают под люминесцентным микроскопом по характерному свечению.

Для получения антител используют высокоактивные гипериммунные сыворотки, из которых выделяют антитела и метят их флуорохромом. В качестве флуорохрома наиболее часто используют ФИТЦ-флуоресцеин изотиоционат (зеленое свечение) и РСХ-родамин сульфохлорид (красное свечение). Антитела, меченные флуорохромом, называют конъюгатом.

Методика приготовления и окрашивания препаратов заключается в следующем:

  • готовят на предметных стеклах мазки, отпечатки из органов или на покровных стеклах — инфицированную культуру клеток; можно использовать и гистосрезы;
  • препараты подсушивают на воздухе и фиксируют в охлажденном ацетоне при комнатной температуре или при минус 15 °С (от 15 мин до 4—16 ч);
  • окрашивают по прямому или непрямому методу; ведут учет под люминесцентным микроскопом по интенсивности свечения, оцениваемому в крестах.

Параллельно готовят и окрашивают препараты от здорового животного — контроль.

Различают два основных метода применения флуоресцирующих антител: прямой и непрямой.

Прямой метод (одноступенчатый). На фиксированный препарат наносят конъюгат (флуоресцирующую сыворотку к предполагаемому вирусу), выдерживают 30 мин при температуре 37 °С во влажной камере. Затем препарат отмывают от несвязанного конъюгата физиологическим раствором (pH 7,2 — 7,5), подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под микроскопом.

Прямой метод позволяет обнаружить и идентифицировать антиген. Для этого нужно иметь на каждый вирус флуоресцирующую сыворотку.

Непрямой метод (двухступенчатый). На фиксированный препарат наносят немеченую сыворотку, содержащую антитела к предполагаемому вирусу, выдерживают 30 мин при 37 °С, отмывают несвязанные антитела. На препарат наносят флуоресцирующую антивидовую сыворотку, соответствующую виду животного — продуцента гомологичных противовирусных антител, выдерживают 30 мин при 37 °С. Затем препарат отмывают от несвязанных меченых антител, подсушивают на воздухе, наносят нефлуоресцирующее масло и исследуют под люминесцентным микроскопом.

Антивидовые сыворотки получают, иммунизируя глобулинами животных тех видов, которые служат продуцентами антивирусных антител. Так, если антивирусные антитела получали на кроликах, то используют флуоресцирующую антикроличью сыворотку.

Непрямой метод позволяет не только обнаружить и идентифицировать антиген, но и выявить и определить титр антител. Кроме того, этим методом можно обнаруживать одной меченой сывороткой антигены различных вирусов, так как он основан на использовании антивидовых сывороток. Чаще применяют антикроличьи, антибычьи, антилошадиные сыворотки и сыворотки против глобулинов морской свинки.

Разработаны несколько модификаций непрямого метода. Наибольшего внимания заслуживает метод с использованием комплемента. Метод заключается в том, что на фиксированный препарат наносят инактивированную нефлуоресцирующую специфическую сыворотку и комплемент морской свинки, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, и для выявления комплекса антиген + антитело + комплемент наносят флуоресцирующую антикомплементарную сыворотку, выдерживают 30 мин при 37 °С, промывают, подсушивают на воздухе и исследуют под люминесцентным микроскопом.
Короче:
Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом.

Достоинства РИФ: высокая специфичность и чувствительность; простота техники постановки; требуется минимальное количество компонентов. Это экспресс-метод диагностики, так как в течение нескольких часов можно получить ответ. К недостаткам можно отнести субъективизм в оценке интенсивности свечения и, к сожалению, иногда флуоресцирующие сыворотки бывают плохого качества. В настоящее время РИФ широко применяют в диагностике вирусных болезней животных.

46. Реакция нейтрализации токсина антитоксином. Механизм. Способы постановки, применение.
Реакции нейтрализации (РН) основаны на способности AT связывать различные возбудители или их метаболиты, лишая тем самым их возможности реализовать свои биологические свойства (иными словами, AT нейтрализуют возбудителей). На практике РН применяют для выявления вирусов и различных токсинов. В определённой степени к ним же относят реакции торможения вирусиндуцированной гемагглютинации и иммобилизации.
 Реакции нейтрализации вирусов.
 В сыворотке крови переболевших лиц циркулируют AT, нейтрализующие вирусы. Их наличие выявляют смешиванием культуры возбудителя с сывороткой с последующим введением лабораторному животному или заражением культуры клеток. На эффективность нейтрализации указывает выживание животного либо отсутствие гибели клеток в культурах. Реакции нейтрализации токсинов.
Реакции нейтрализации токсинов.
Применяется для идентификации бактериальных экзотоксинов по видовой и типовой их принадлежности, а также для определения содержания антитоксинов в исследуемой сыворотке. Принцип основан на способности антитоксинов связывать токсин и блокировать его действие. Для идентификации токсина и определения титра антитоксических AT их смесь вводят лабораторным животным. При соответствии типа токсина и антисыворотки гибели животных не наблюдают. Нейтрализацию токсинов in vitro определяют в реакции флоккуляции. Для определения антитоксического иммунитета у человека часто применяют кожные пробы (например, пробу Шика).
Эту реакцию можно проводить или in vitro или in vivo; РН in vitro проводят или в пробирке (реакция флоккуляции, в положительном случае образуется рыхлый осадок – флоккулят) или в геле (в варианте реакции по Оухтерлони – например, для выявления токсигенности дифтерийной палочки); РН in vivo проводят следующим образом: токсин смешивают с антитоксической сывороткой и водят лабораторному животному – если эффект действия токсина (местно или в виде гибели животного) не наблюдается, то РН положительная, если эффект действия токсина проявляется (некроз кожи при местном введении, гибель животного при парентеральном введении) РН отрицательная.

47. Реакция преципитации. Механизм, компоненты. Способы постановки. Применение.
Реакция преципитации - РП (от лат praecipilo осаждать) - это формирование и осаждение комплекса растворимого молекулярного антигена с антителами в виде помутнения, называемого преципитатом. Он образуется при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах, избыток одного из них снижает уровень образования иммунного комплекса.
Реакцию преципитации ставят в пробирках (реакция кольцепреципитации), в гелях, питательных средах и др. Широкое распространение получили разновидности реакции преципитации в полужидком геле агара или агарозы, двойная иммунодиффузия по Оухтерлони, радиапьная иммунодиффузия, иммуноэпектрофорез и др.
1)Реакция кольцепреципитации. Реакцию проводят в узких преципитационных пробирках: на иммунную сыворотку наслаивают растворимый антиген. При оптимальном соотношении антигена и антител на границе этих двух растворов образуется непрозрачное кольцо преципитата. Если в качестве антигенов в реакции используют прокипяченные и профильтрованные экстракты тканей, то такая реакция называется I реакцией-термопреципитации (реакция, при которой выявляют сибиреязвенный гаптен).

2)Реакция двойной иммунодиффузии по Оухтерлони. Для постановки реакции растопленный агаровый гель тонким слоем выливают на стеклянную пластинку и после затвердевания в нем вырезают лунки. В лунки геля раздельно помещают антигены и иммунные сыворотки, которые диффундируют навстречу друг другу. В месте встречи в эквивалентных соотношениях они образуют преципитат в виде белой полосы. У многокомпонентных систем между лунками с антигенами и антителами появляется несколько линий преципитата; у идентичных АГ линии преципитата сливаются; у неидентичных АГ - пересекаются.

3)Реакция радиальной иммунодиффузии. Иммунную сыворотку с расплавленным агаровым гелем равномерно наливают на стекло. После застывания в геле делают лунки, в которые помещают антиген в различных разведениях. Антиген, диффундируя в гель, образует с антителами кольцевые зоны преципитации вокруг лунок. Диаметр кольца преципитации пропорционален концентрации антигена. Реакцию используют для определения в сыворотке крови иммуноглобулинов различных классов, компонентов системы комплемента и др.
4)Иммуноэлектрофорез - сочетание метода электрофореза и иммунопреципитации: смесь антигенов вносится в лунки геля и разделяется в геле с помощью электрофореза, затем в канавку параллельно зонам электрофореза вносят иммунную сыворотку, антитела которой диффундируют в гель и образуют в месте "встречи" с антигеном линии преципитации.

5)Реакция флоккуляции (по Рамону) (от лат . f1оecus - хлопья шерсти) - появление опалесценции или хлопьевидной массы (иммунопреципитации) в пробирке при реакции токсин - антитоксин или анатоксин - антитоксин. Ее применяют для определения активности антитоксической сыворотки или анатоксина.

 

48. Роль неспецифической резистентности и иммунитета в развитии инфекции.
Выделяют две основные формы иммунитета- видовой (врожденный) и приобретенный.

В основе видового иммунитета лежат различные механизмы естественной неспецифической резистентности. Среди них- кожные покровы и слизистые оболочки, нормальная микробиота организма, фагоцитоз, воспаление, лихорадка, система комплемента, барьерные механизмы лимфоузлов, противомикробные вещества, выделительные системы организма, главная система гистосовместимости.

Кожа и слизистые- первая линия защиты против возбудителей. Кроме функции механического (анатомического) барьера кожа обладает бактерицидной активностью. Слизь, лизоцим, желудочный сок, слезная жидкость, слюна, деятельность мерцательного эпителия способствует защите слизистых оболочек.

Нормальная микрофлора организма препятствует колонизации организма посторонней микрофлорой (конкуренция за субстраты, различные формы антагонизма, в т.ч. выделение антибиотических веществ, изменение рН и др.).

Фагоцитоз и система комплемента- вторая линия защиты организма против микроорганизмов, преодолевших поверхностные барьеры. Клеточные факторы системы видовой резистентности- фагоциты, поглощающие и разрушающие патогенные микроорганизмы и другой генетически чужеродный материал. Представлены полиморфоядерными лейкоцитами или гранулоцитами- нейтрофилами, эозинофилами и базофилами (клетками миелопоэтического ряда), а также моноцитами и тканевыми макрофагами (клетками макрофагально- моноцитарной системы).

Стадии фагоцитоза.

1.Активация (усиление энергетического метаболизма). Факторами активации и хемотаксиса являются бактериальные продукды (ЛПС, пептиды), компоненты комплемента (С3 и С5), цитокины и антитела.
2.Хемотаксис.
3.Адгезия.
4.Поглощение.
5.Исход фагоцитоза.

Адгезия связана с наличием ряда рецепторов на поверхности фагоцитов ( к Fc- фрагментам антител, компонентам комплемента, фибронектину), обеспечивающих прочность рецептор- опосредованных взаимодействий опсонинов, обволакивающих микроорганизмы и ограничивающих их подвижность (антитела, С3в, фибронектин).

Фагоциты обладают амебоподобными псевдоподиями. При поглощении образуется фагосома с поглощенным объектом (бактерией), к ней присоединяется и сливается содержащая литические ферменты лизосома, образуется фаголизосома.

Возможно три исхода фагоцитоза:
- завершенный фагоцитоз;
- незавершенный фагоцитоз;
- процессинг антигенов.

Завершенный фагоцитоз- полное переваривание микроорганизмов в клетке- фагоците.

Незавершенный фагоцитоз- выживание и даже размножение микроорганизмов в фагоците. Это характерно для факультативных и особенно - облигатных внутриклеточных паразитов. Механизмы персистирования в фагоцитах связаны с блокадой фагосомо- лизосомального слияния (вирус гриппа, микобактерии, токсоплазмы), резистентностью к действию лизосомальных ферментов (гонококки, стафилококки), способностью микробов быстро покидать фагосомы после поглощения и длительно пребывать в цитоплазме (риккетсии).

В процессе фагоцитоза происходит “окислительный взрыв” с образованием активных форм кислорода, что обеспечивает бактерицидный эффект.

К одной из важнейших функций макрофагов (наряду с хемотаксисом, фагоцитозом, секрецией биологически активных веществ) является переработка (процессинг) антигена и представление его иммунокомпетентным клеткам с участием белков главной системы гистосовместимости (МНС) класса 2.

Фагоцитоз- не только уничтожение чужеродного, но и представление антигена для запуска иммунных реакций и секреции медиаторов иммунных и воспалительных реакций. Система макрофагов- центральное звено не только естественной резистентности (видового иммунитета), но и играет важную роль в приобретенном иммунитете, кооперации клеток в иммунном ответе.

Воспаление.
Инфекционное воспаление сопровождается различными сосудистыми и клеточными (включая фагоцитоз) реакциями, а также запуском целого ряда медиаторов воспалительных реакций (гистамина, серотонина, кининов, белков острой фазы воспалеия, лейкотриенов и простагландинов, цитокинов, системы комплемента).

Многие бактериальные продукты активируют клетки макрофагально- моноцитарной системы и лимфоциты, отвечающие на них выделением биологически активных продуктов- цитокинов, в частности интерлейкинов. Их можно характеризовать как медиаторы клеточных иммунных реакций. В воспалительных реакциях основную роль имеет интерлейкин-1 (ИЛ-1), стимулирующий лихорадку, повышающий проницаемость сосудов и адгезивные свойства эндотелия, активирующий фагоциты.

Лихорадка. Повышение температуры тела- защитная реакция организма, ухудшающая условия для размножения многих микроорганизмов, активирует макрофаги, ускоряет кровоток и усиливает обменные процессы в организме.

Барьерные функции лимфоузлов. По выражению П.Ф.Здродовского (1969) лимфоузлы- своеобразный биологический фильтр для возбудителей, переносимых с лимфой. Здесь проникшие через кожу или слизистые и занесенные током лимфы микроорганизмы задерживаются и подвергаются действию макрофагов и активированных лимфоцитов.

Система комплемента- комплекс белков и гликопротеидов сыворотки крови человека и позвоночных животных (их более 20). Отдельные компоненты опосредуют процессы воспаления, опсонизацию чужеродных фрагментов для последующего фагоцитоза, участвуют наряду с макрофагами в непосредственном уничтожении микроорганизмов и других чужеродных клеток (лизис бактерий и вирусов). В условиях физиологической нормы компоненты системы комплемента находятся в неактивной форме. Известны три пути активации системы комплемента- классический, альтернативный и с использованием С1- шунта.

Классический путь- каскад протеазных реакций с компонента С1q до С9, реализуется при наличии антител к соответствующему антигену. С комплексом “антиген- антитела” взаимодействует компонент С1q, затем С4, следом- С2. Образуется комплекс “антиген- антитела-С1С4С2”, с ним соединяется С3 (центральный компонент системы) и запускается цепь активации с эффекторными функциями (опсонизация и лизис бактерий, активация системы макрофагов, воспаление).

Альтернативный путь реализуется при первичном контакте с возбудителем (когда еще нет антител). Он индуцируется ЛПС и другими микробными антигенами. С1, С4, С2 не участвуют, альтернативный и классический пути смыкаются на уровне С3.






















































































Система интерферонов.

Интерфероны- синтезируемые различными клетками организма гликопротеиды широкого спектра биологической активности (прежде всего антивирусной), быстрый ответ организма на получение клетками неспецифического сигнала чужеродности. Существует целая система интерферонов, которые разделены на альфа, бета и гамма подтипы с выраженной гетерогенностью свойств. Противовирусное действие проявляется в способности подавлять внутриклеточное размножение ДНК- и РНК- вирусов (прежде всего в результате блокировки синтеза вирусных макромолекул). Индукцию синтеза интерферонов вызывают вирусы, бактерии, риккетсии, простейшие, синтетические соединения.

Киллерные клетки.

В обеспечении видового иммунитета существенную роль принадлежит Т- цитотоксическим лимфоцитам (Т- киллерам), а также главной системе гистосовместимости (подробнее- в следующих лекциях).

Т- киллеры по представлению антигенов главной системы гистосовместимости класса 1 распознают любые чужеродные антигены (включая мутантные, например- раковые клетки), атакуют и уничтожают их.

Клетки NK (naturalkiller- натуральные киллеры) имеют важное значение в поддержании генетического гомеостаза и противоопухолевой защите, их функции распознавания не зависят от представления антигенов МНС (majorhistocompatibilitycomplex) класса 1.

Системы неспецифической резистентности и видового иммунитета способствуют поддержанию структурной и функциональной целостности организма и являются основой для формирования приобретенного (специфического) иммунитета. Стыкуясь на этом, более высоком уровне, системы видового и приобретенного иммунитета образуют единую и наиболее эффективную систему самозащиты организма от всего чужеродного.

49. Рост и размножение бактерий в искусственных условиях. Фазы размножения.
Бактериальные клетки размножаются в результате деления. Основные стадии размножения микробов в жидкой среде в стационарных условиях:
- лаг- фаза (начальная стадия адаптации с медленным темпом прироста биомассы бактерий);

- экспоненциальная (геометрического роста) фаза с резким ростом численности популяции микроорганизмов (2 в степеии n);

- стационарная фаза (фаза равновесия размножения и гибели микробных клеток);

- стадия гибели - уменьшение численности популяции в связи с уменьшением и отсутствием условий для размножения микроорганизмов (дефицит питательных веществ, изменение рH, rH2, концентрации ионов и других условий культивирования).

Данная динамика характерна для периодических культур с постепенным истощением запаса питательных веществ и накоплением метаболитов.

Если в питательной среде создают условия для поддержания микробной популяции в экспоненциальной фазе- это хемостатные (непрерывные) культуры.

Характер роста бактерий на плотных и жидких питательных средах: сплошной рост, образование колоний, осадок, пленка, помутнение.

Основные принципы получения чистых культур (популяций одного вида микроорганизмов): механическое разобщение, рассев, серийные разведения, использование элективных сред, особых условий культивирования (с учетом устойчивости некоторых микробов к определенным температурам, кислотам, щелочам, парциальному давлению кислорода, рН и мн.др).

50. Серодиагностика инфекционных заболеваний. Принципы и диагностические критерии.
Сущность серологических методов исследования состоит в определении титра антител в сыворотке крови больного в динамике болезни по отношению к известному антигену, вводимому в серологическую реакцию.

В клинической практике чаще всего используется реакция агглютинации (РА) Видаля, ее разновидности, РНГА, РСК и более информативные современные методы (ИФА, РИА, ЛИФА и др.).

РА — определение неизвестных антител с помощью известных антигенов и установление вида возбудителя с помощью известных антител. РИГА и РНГА — более специфичны, используются меченные эритроциты. РТГА — основан на способности некоторых вирусов агглютинировать эритроциты. РИ — реакция иммунодиффузии, различная способность антигенов и антител диффундировать в геле. РСК-титрование антигенов или антител по степени фиксации комплемента с комплексом антиген-антитело. PH - способность антител нейтрализовать токсины и антигены вирусов. ИФА — используются антитела, конъюгированные с ферментом. РИА — используется радиоактивная метка антигенов или антител. ЛИФА — лантанидный иммунофлюоресцентный анализ — используются в качестве метки элементы редкоземельных металлов.
Некоторые подробнее:
Реакция связывания комплемента (РСК). В РСК помимо антигена и антител принимает участие третий компонент - комплемент, который способен связываться с комплексом антиген-антитело. Образование комплексов антиген-антитело и фиксация комплемента не сопровождаются видимыми изменениями. Для обнаружения связывания комплемента используют дополнительную индикаторную гемолитичесчкую систему (эритроциты барана, обработанные гемолитической антисывороткой). В присутствии комплемента (сыворотки морской свинки) происходит лизис эритроцитов. Если в опытной системе образовались комплексы антиген-антитело, которые связывают комплемент, то лизис эритроцитов в индикаторной системе не произойдет (реакция положительная). РСК используется при определении антител к вирусу Коксаки, при лабораторной диагностике сифилиса - реакция Вассермана.
РИФ-смотри вопрос 45
Иммуноферментный анализ (ИФА). В методах иммуноферментного анализа используют иммунореагенты, меченные ферментами. Наиболее широко используется твердофазный ИФА. В качестве твердой фазы используют полистироловые или поливиниловые планшеты или шарики, на которых адсорбированы антигены или антитела. Для выявления антител известный антиген адсорбируют в лунках полистироловой пластины. Затем вносят исследуемую сыворотку, в которой хотят обнаружить антитела к данному антигену. После инкубации лунки промывают для удаления несвязавшихся белков и вносят в них антииммуноглобулиновые антитела, меченые ферментом. После инкубации и отмывания в лунки добавляют специфичный для фермента субстрат и хромоген для регистрации конечных продуктов расщепления субстрата. О наличии и количестве антител судят по изменению цвета и интенсивности окраски раствора. Методы ИФА обладают высокой чувствительностью и специфичностью и получили наиболее широкое распространение среди иммунологических методов клинико-лабораторной диагностики.

 










Последнее изменение этой страницы: 2018-04-12; просмотров: 908.

stydopedya.ru не претендует на авторское право материалов, которые вылажены, но предоставляет бесплатный доступ к ним. В случае нарушения авторского права или персональных данных напишите сюда...