Примеры тестов контроля исходного уровня знаний

Вид 1. Один наиболее верный ответ.

1.1. Молярная активность (число оборотов) выражается в … .

а) моль/мг мин     б) моль/сек в) кат/ г-моль      г) моль/кг сек

1.2. Мультиэнзимные комплексы представляют собой … .

а) надмолекулярные структуры

б) иммобилизованные ферменты

в) олигомерные белки

г) множественные формы ферментов

Вид 2. Установите соответствие.

2.1.  Наследственное заболевание – дефектный фермент

1. фенилкетонурия                                 а) глюкозо-6-фосфатаза

2. алкаптонурия                                     б) тирозиназа

3. болезнь Гирке                                    в) фенилаланингидроксилаза

4. галактоземия                                      г) гомогентезиназа

5. альбинизм                                          д) галактокиназа

2.2. Единицы измерения активности ферментов

1. число оборотов                                  а) кат/г-моль

2. катал                                                   б) мкмоль/мин

3. международные единицы                  в) моль/сек

2.3. Заболевание – индикаторный фермент.

1. острый панкреатит            а) ЛДГ(изоферменты)

2. вирусный гепатит              б) аминотрансферазы

3. заболевания костей           в) креатинкиназа (изоферменты)

4. механическая желтуха       г) щелочная фосфатаза (изоферменты)

5. рак предстательной железы д) кислая фосфатаза

6. инфаркт миокарда             е) α-амилаза

Вид 3. Правильное сочетание ответов.

3.1. Преимущества иммобилизованных ферментов:

1. имеют большую специфичность к субстрату

2. отличаются большей активностью

3. отличаются механизмом катализа

4. имеют большую стабильность

5. не могут использоваться многократно

     3.2. Изоферменты лактатдегидрогеназы отличаются …

1. субъединичным составом

2. тканевой локализацией

3. электрофоретической подвижностью

4. внутриклеточной локализацией

5. катализируемой реакцией

 Вид 4. Определите правильность утверждений в предложении и

установите  наличие причинной связи между ними.

4.1. Определение активности ферментов необходимо производить при полном насыщении фермента субстратом - при Кm>[S], поскольку именно в этих условиях скорость реакции будет пропорциональна концентрации фермента.

4.2. При электрофорезе в полиакриламидном геле изофермент ЛДГ ₁ первым мигрирует к аноду, поскольку состоит из 4-х М-субъедниц, обладающих наибольшим отрицательным зарядом.

Примеры ситуационных задач

Задача 1. При добавлении в среду 0,002 мкмоль кристаллического фермента лактатдегидрогеназы наблюдается превращение субстрата со скоростью 9,6 мкмоль в минуту.  Подсчитайте молярную активность (число оборотов) фермента.

Задача 2. Сколько граммов субстрата с молекулярной массой 672 г/моль может преобразовать фермент, если его активность составляет 5нКат, а время инкубации – 20 сек.

Задача 3.В приемное отделение больницы доставлен больной с подозрением на инфаркт миокарда. Определение активности каких ферментов помогут в подтверждения диагноза?

Методы количественного определения

Активности некоторых ферментов

Работа № 1. Определение активности амилазы ротовой жидкости

По Вольгемуту.

Амилаза - фермент, осуществляющий гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы (химизм реакции см. занятие№6). Конечные продукты действия амилазы не дают цветной реакции с йодом. Наиболее богаты амилазой слюнные и поджелудочная железы.

Клинико-диагностическое значениеимеет определение активности амилазы в крови, куда она попадает из поджелудочной железы (40%) и слюнных желез (60%). Амилазная активность крови по Вольгемуту в норме составляет 25-125 Ед/л. При остром панкреатите в первые сутки заболевания активность амилазы крови возрастает в десятки раз, а затем постепенно возвращается к норме. Амилазная активность крови увеличивается также при паротите (воспалении слюнных желез). Амилаза имеет небольшую молекулярную массу – 45 000, поэтому легко проходит почечный фильтр и попадает в мочу. В связи с меньшей инвазивностью определение амилазной активности мочи (диастазный тест) широко используется в клинике для диагностики состояния поджелудочной железы (см. УИРС).

Принцип метода. Метод основан на том, что слюну разводят в определенной последовательности, после чего приливают одно и тоже количество раствора крахмала и находят наименьшее содержание фермента, которое полностью расщепляет все количество добавленного крахмала. Затем производят перерасчет активности фермента на 1 мл слюны.

Амилазная активность слюны или амилокластичекая сила слюны выражается количеством 0,1% раствора крахмала в мл, которое может расщепляться 1 мл слюны при температуре 38⁰ в течении 30 мин.

В норме амилазная активность слюны составляет 160-320 ед.

Ход работы. В 10 пронумерованных пробирок наливают по 1 мл воды. Затем в первую пробирку добавляют 1 мл слюны, разведенной в 10 раз. Содержимое  первой пробирки перемешивают и 1 мл раствора (суммарное разведение в 20 раз) переносят из 1-й пробирки во вторую, перемешивают( рслюна разведена в 40 раз). Затем 1 мл разведенной слюны из второй переносят в третью и.т.д. - из предыдущей пробирки в следующую. Из 10 пробирки 1 мл смеси выливают. Таким образом, получается ряд разведенной слюны, в котором в каждой последующей пробирки содержание фермента вдвое меньше, чем в предыдущей.

Во все пробирки добавляют по 1 мл воды и по 2 мл 0,1% раствора крахмала, перемешивают и помещают пробирки в термостат на 30 мин при температуре 38⁰.

Через 30 минут пробирки вынимают, охлаждают, добавляют по 1-2 капле 1% раствора йода и перемешивают. Жидкость в пробирках в зависимости от степени расщепления крахмала может окрашиваться в желтый, розовый, красный и фиолетовый цвет. Раствор желтого цвета свидетельствует о полном расщеплении крахмала, фиолетовый – о том, что крахмал в растворе еще сохранился.

Работу необходимо оформить в виде таблицы.

Расчет. Берется количество слюны в последней пробирке с желтой окраской. Если это четвертая пробирка, то разведение слюны в ней – 160 раз. Составляется пропорция: 1). 160 мл слюны расщепляет 2 мл 0,1% р-ра крахмала; 2) 1 мл слюны расщепляет Х мл 0,1% р-ра крахмала, т.е. амилокластическая активность слюны составляет 320 ед.