Работа № 2. Выделение муцина слюны и определение в нем углеводного компонента.

Углевод в муцине можно обнаружить с помощью реакции Молиша. Реакция основана на дегидратации гексоз и пентоз с образованием оксиметилфурфурола и фурфурола при действии концентрированной серной кислоты, которые  дают с тимолом продукт конденсации красного цвета.

			+			продукт конденсации красного цвета
рибоза		фурфурол		тимол

Порядок выполнения работы. В пробирку собирают около 2 мл слюны и по каплям (4-5 капель) приливают концентрированную уксусную кислоту. Выпадает осадок муцина, трудно растворимый в избытке уксусной кислоты. Жидкость из пробирки осторожно сливают. Со сгустком муцина проделывают реакцию Молиша, доказывающую присутствие в белке углеводов. Для этого к сгустку муцина добавить 0,5-1,0 мл 1% спиртового раствора тимола. Содержание пробирки перемешать, по стенке пробирки наслоить равный объем концентрированной серной кислоты. Появляется красное окрашивание.

Работа № 3. Выделение казеиногена из молока.

В молоке казеиноген содержится в виде растворимой кальциевой соли. При подкислении достигается изоэлектрическая точка, и казеиноген выпадает в осадок в свободном виде. Избыток кислоты мешает осаждению, т.к. при pH ниже изоэлектрической точки (pH=4,7) молекулы белка перезаряжаются, и казеиноген вновь переходит в раствор.

Ход работы. Молоко (2 мл) разбавляют равным объемом дистиллированной воды и осаждают казеиноген добавлением 2 капель 10% раствора уксусной кислоты. Казеин выделяется в виде хлопьевидного осадка, который отфильтровывают и промывают на фильтре дистиллированной водой (2-3 раза). Небольшие порции осадка снимают с фильтра стеклянной палочкой и употребляют для цветных реакций на белки (провести биуретовую пробу).

Работа № 4. Гидролиз казеина и открытие в гидролизате фосфорной кислоты.

Ход работы. 100 мг порошка казеина растворяют в пробирке в 3 мл 10% раствора едкого натра или кали. Пробирку закрывают пробкой со стеклянной трубкой в качестве холодильника, закрепляют ее на асбестовой сетке металлической лапкой и нагревают. Через час после начала кипения жидкости гидролиз прекращают, жидкости дают остыть и нейтрализуют ее концентрированной азотной кислотой (12-15 капель) до слабокислой реакции на лакмус. При нейтрализации выпадает осадок высокомолекулярных продуктов неполного гидролиза белков (пептоны). После отстаивания жидкость фильтруют, с фильтром проделывают молибденовую пробу на фосфорную кислоту (к 20 каплям молибденового реактива добавляют 2-3 капли гидролизата и кипятят несколько минут на голом огне). Выпадает небольшой кристаллический осадок фосфорномолибденовокислого аммония (лимонно-желтого цвета).

12(NH₄)₂·Mo O₄ + H₃PO₄ + 21HNO₃ → (NH₄)₃PO₄·12Mo O₃ + 21 NH₄NO₃ + 12 H₂O

                                              желтый кристаллический осадок

    По результатам проведенных качественных проб на простетические группы сложных белков заполните следующую таблицу: