МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ АНТИ-А И АНТИ-В

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ

СИСТЕМЫ АВО

Стандартными сыворотками

Необходимое оснащение:             

I.   Стандартные гемагглютинирующие сыворотки 0 /I/, А /II/, В /III/ групп в 2^х  

сериях, одна ампула стандартной сыворотки АВ /IV/ группы.

2.  Флакон с изотоническим раствором хлорида натрия.

3.  Тарелочка с ячейками для определения группы крови.

4.  Одноразовые копья-скарификаторы.

5.  Стерильные ватные шарики.

6.  Спирт 70%.

7.  7 пипеток.

8.  Стеклянные палочки, 7 штук /или 2 предметных стекла/.

9.  Песочные часы на 5 мин.

10. Испытуемая кровь.

Определение группы крови проводят в помещении с температу­рой +15-25°С.

11. Ёмкость с дезинфицирующим раствором.

12. Защитная одежда для м/с (фартук, очки, перчатки)

ТРЕБОВАНИЯ К СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ,

 ИХ МАРКИРОВКА И ХРАНЕНИЕ.

I. Каждая ампула стандартной сыворотки должна иметь паспорт-эти­кетку с указанием места изготовления, группы крови, номера серии, титра /не менее 1:32/, срока годности. Ампулой без этикетки поль­зоваться нельзя.

2. Сыворотки должны быть специфичны, т.е. агглютинировать одноименные агглютиногены, не давать агглютинации с эритроцитами О /I/ группы, т.к. в ней нет агглютиногенов.

3. Сыворотки должны быть светлыми, прозрачными, без хлопьев, не высохшими. Наличие хлопьев, осадка, помутнения являются приз­наками непригодности сыворотки.

4. Титр сыворотки должен быть не менее 1:32, активность вы­сокой: первые признаки агглютинации должны появляться не позднее 30 секунд.               

5. Сыворотки с просроченными сроками хранения к использова­нию не пригодны.

6. Стандартные сыворотки для определения группы крови по системе АВО выпускают с определенной цветовой маркировкой: 0 /I/ -бесцветная, А /II/ - голубая, В/ III/ - красная, АВ /IV/ - желтая. Соответствующая цветовая маркировка имеется на этикетке в виде цветных полос: 0 /I/ - без полос, А /II/ - две синие полосы, Б /III/ три красные, АВ /IV/ - четыре желтые.

7. Сыворотки хранят при температуре +4+6°С /на нижней полке холодильника/. За 30 минут до определения группы крови их необходимо вынуть из холодильника и согревать при комнатной температуре.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ

СТАНДАРТНЫМИ СЫВОРОТКАМИ

1. На тарелочке с ячейками подписывают фамилию больного /донора/.

2. Наносят из штатива со стандартными сыворотками в каж­дую ячейку соответственно по 2-3 капли стандартной сыворотки 2-х серий.

3. Обрабатывают спиртовым шариком IV п.левой кисти, про­калывают стерильным скарификатором мякоть ногтевой фаланги, уда­ляют первую каплю.

4. Рядом с каждой каплей сыворотки наносят с помощью сте­клянной палочки каплю испытуемой крови в соответствии 10:1.

5. Капли сыворотки и крови в каждой ячейке смешивают от­дельной стеклянной палочкой /или чистым углом предметного стекла/

6. По мере наступления агглютинации /не ранее 2-3 мин./ в капли смеси сыворотки с кровью добавляют по 1-2 капли изотони­ческого раствора /для устранения ложной агглютинации/.

7. Смешивают капли легким покачиванием тарелочки в течение 5 мин..

8. Читают результат /должен совпадать в 2^х сериях/:

О  / I / группа - агглютинации нет нигде.

А  / II / группа - агглютинация в I и III гр.

В / III / группа - агглютинация в I и II гр.

АВ /IV/ группа - агглютинация в I, II, III гр.

9. При наличии агглютинации во всех сериях проводят кон­троль для исключения неспецифической панагглютинации со стандарт­ной сывороткой АВ /IV/ гр.  Агглютинации не должно быть.

10. Выявление других комбинаций говорит; о неправильном оп­ределении групповой принадлежности крови больного. Определение группы крови нужно провести вновь с сыворотками других серий.

11. Сведения о группе крови больного выносят на лицевую сторону истории болезни за подписью врача, с указанием даты исследования.

ВОЗМОЖНЫЕ ОШИБКИ ПРИ ОПРЕДЕЛЕНИИ

ГРУППЫ КРОВИ

I. Ошибки технические:

I. Неправильное расположение стандартных сывороток или стандартных эритроцитов на тарелке приводит к неправильной оценке результатов.

2. Смешивание сывороток или эритроцитов на тарелке и соответственно этому неверная оценка результата.

3. Неправильное соотношение между эритроцитами и стандарт­ной сывороткой /должно быть 1:10/.

4. Преждевременная оценка результатов /не ранее 5 мин./.

5. Использование для промывания пипеток, водопроводной или дистиллированной воды, а не физиологического раствора.

6. За агглютинацию принимается краевая скученность эритро­цитов.

7. За истинную агглютинацию принимается ложная /для исклю­чения ложной агглютинации добавляется после 3 мин. физиологи­ческий р-р/.                       

8. Определение группы крови при температуре в помещении ниже 15° или выше 25°С°

9. Определение группы крови в гемолизированном, инфициро­ванной, загнившей или содержащем слизь образце крови.

II. Ошибки, обусловленные недоброкачественностью стандартных сывороток:

1. Использование сывороток с истекшим сроком годности.

2. Использование сывороток с низкой активностью /титр должен быть не ниже, чем 1:32/.

3. Использование инфицированных, загнивших, высыхающих сывороток.

III. Ошибки. обусловленные биологическими особенностями испытуе­мой крови:                    

1. Наличие в испытуемых эритроцитах слабого варианта агглютиногена А или В /A₂, A₃ и др. В₅, В слабый/.

2. Снижение активности агглютининов А или В при некоторых заболеваниях /О. сепсис, лейкозы/.

3. Феномен панагглютинации со стандартными сыворотками всех групп.

IV. Ошибки, связанные с неспцифической агглютинацией:

1. Ложная агглютинация /для исключения добавляют физиоло­гический р-р после 3 мин./.

2. Холодовая агглютинация /температура в помещении должна быть не ниже 15 °С/.

3. Панагглютинация /группа крови в данном случае определя­ется по стандартным эритроцитам - перекрестным методом/.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ СИСТЕМЫ АВО С ПОМОЩЬЮ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

 АНТИ-А И АНТИ-В

/ ЦОЛИКЛОНЫ АНТИ-А И АНТИ-В/.

Цоликоны анти-А и анти-В применяются для определения группы крови человека системы АВО взамен стандартных изогемагглютинирующих сывороток путем выявления антигенов А и В в эритроцитах стандартными антителами, содержащимися в цоликлонах. Названные цоликлоны представляют разведенную асцитическую жидкость мышей, содержащую иммуноглобулин М против антигенов А и В. Цоликлоны дают более быструю и более выраженную реакцию агглютинации, чем стандартные АВО-сыворотки.

При использовании цоликлонов исключается передача вируса гепатита и ВИЧ. Определяют группу крови при температуре +15 +25°С. Цоликлоны анти-А и анти-В выпускаются в жидком виде в ампулах или флаконах, жидкость окрашена в красный /анти-А/ и синий /анти-В/ цвет. Хранят их в холодильнике при температуре +2+8°С. Срок хранения 2 года.

МЕТОДИКА ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГРУППЫ КРОВИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ АНТИ-А И АНТИ-В

I. На фарфоровую пластинку или маркированную тарелку нано­сят по одной большой капле цоликлонов анти-А и анти-В.

 2. Рядом наносят каплю исследуемой крови в 5 раз меньшего размера.  

3. Смешивают каплю крови и цоликлоны отдельными палочками или уголками предметных стекол.

4. Пластинку /тарелочку/ покачивают и наблюдают за реакци­ей в течение

3 мин. Реакция обычно наступает в первые 3-5 сек. и проявляется в виде образования мелких красных агрегатов, а за­тем хлопьев.  

5. Читают результат: 0 / I / - агглютинация отсутствует с цоликлонами анти-А и анти-В /кровь не содержит агглютинагенов А и В

 А / II /- агглютинация наблюдается в цоликлоне анти-А /эритроциты крови содержат агглютинаген А /;

В /III/ - агглютинация наблюдается с цоликлоном анти-В /эритроциты крови содержат агглютинаген В /;

АВ /IV/ - агглютинация наблюдается с цоликлонами анти-А и анти-В /эритроциты содержат агглютинагены  А и В/.

    6. При наличии агглютинации с цоликлонами анти-А и анти-В

 /гр. крови AB / IV / для исключения неспецифической агглютинации про­изводят дополнительные контрольные исследования с изотоническим раствором хлорида натрия. Большую каплю /0,1 мл/ изотонического раствора смешивают с маленькой каплей /0,01 мл/ исследуемой крови,

Отсутствие агглютинации подтверждает принадлежность иссле­дуемой крови к АВ /IV/ группе. При наличии агглютинации проводят определение группы крови с использованием отлитых стандартных эритроцитов /перекрестный метод/.

ПРОБЫ НА СОВМЕСТИМОСТЬ

В настоящее время переливают только одногруппную кровь по системе АВО. Перед переливанием крови проводят пробы на совме­стимость, которые помогают не только предупредить ошибку в отношении групп крови АВО, но и выявить несовместимость при сен­сибилизации больного к факторам системы резус и антигенам дру­гих систем.

Пробы на совместимость проводят отдельно в отношении групп крови АВО и резус-фактора - Rho /Д/.