Опыт 4. Обнаружение тонопласта (по де Фризу)

Цель опыта: показать различие свойств плазмалеммы и тонопласта.

Материалы и оборудование: микроскоп, предметные и покровные стекла, скальпель или нож, пинцет, препаровальная игла, фильтровальная бумага, 10% раствор KNO₃ с эозином.

Растения: бесцветный лук (Allium cepa).

Ход работы:

Эпидермис вогнутой (морфологически верхней) стороны чешуи бесцветного лука помещают на предметном стекле в каплю 1М (10%) раствора KNO₃ с эозином. Через 3-5 мину начинают наблюдения под микроскопом. Хорошо заметно уменьшение объема вауколи. Вначале протоплазма окружает вакуоль тонким слоем, но очень быстро начинается набухание протоплазмы, а затем отмирание протоплазмы и ядра, вызванные совместным действием KNO₃ и эозина, которые проникли в мезоплазму. Участки отмершей протоплазмы, окрашенные в ярко-розовый цвет хорошо заметны. В течение длительного времени вакуоль остается сократившейся, но не окрашенной в розовый цвет. Следовательно, ни KNO₃, ни эозин не проникают через тонопласт в вакуоль.

Задание: зарисовать наблюдаемые картины и сделать выводы.

Опыт 5. Накопление красителей в вакуоли

Цель опыта: показать различие свойств плазмалеммы и тонопласта.

Материалы и оборудование: микроскоп, предметные и покровные стекла, скальпель или нож, пинцет, препаровальная игла, фильтровальная бумага, 1М (10%) раствор KNO₃, 0,01%-ного водный раствор нейтрального красного, раствор NH₄OH.

Растения: бесцветный лук (Allium cepa).

Одним из способов изучения проницаемости мембран является прижизненное окрашивание, т. е. проникновение красителя из наружной среды во внутренние области живой клетки и постепенное их окрашивание. Катионные (основные) красители (нейтральный красный или метиленовый синий) проникают в живую клетку в молекулярной форме и проходят через плазмалемму, основной цитоплазматический матрикс, тонопласт в вакуоль, где они под влиянием кислой среды переходят в ионную форму. Поскольку мембраны не пропускают ионы красителя, они накапливаются в вакуоли и окрашивают её.

Клетки могут оставаться живыми в окрашенном состоянии в течение нескольких часов или дней. В мертвых клетках мембраны легкопроницаемы для любой формы красителя, поэтому в вакуоли не происходит его накопления.

Об избирательности проницаемости мембран свидетельствует также плазмолиз (рис. 1). В гипертоническом растворе вода выходит из клетки, вакуоль сокращается в результате потери воды, цитоплазма отстает от жесткой клеточной стенки и сжимается вслед за вакуолью. Однако если плазмалемма и тонопласт проницаемы для плазмолитика, то через некоторое время он проникает в вакуоль и происходит деплазмолиз. Скорость деплазмолиза зависит от проницаемости мембран для данного вещества, поэтому её можно использовать для определения проницаемости мембраны.

Рис. 1. Степени плазмолиза: а – цитоплазма; б – вакуоль; 1 – уголковый; 2 – вогнутый; 3 – выпуклый; 4 – судорожный; 5 – колпачковый

Ход работы: на предметное стекло в каплю 0,01%-ного водного раствора нейтрального красного поместить эпидермис с выпуклой поверхности неокрашенного лука, закрыть препарат покровным стеклом и сразу же рассмотреть под микроскопом при малом увеличении. Если видны равномерно окрашенные в розовый цвет клетки, значит, краситель проник в вакуоль. Для доказательства того, что краска проникла через цитоплазму, надо вызвать плазмолиз содержимого клеток. Для этого, не поднимая покровного стекла, в препарат вводится плазмолитик, например, 1 М раствор KNO₃. Наступивший плазмолиз говорит о том, что клетки, окрашенные нейтральным красным, – живые, краситель проник через живую протоплазму. Мертвые клетки имеют окрашенную протоплазму и ядро и не плазмолизируются в растворе солей.

Пользуясь тем, что в работе применяется нейтральный красный, обладающий индикаторными свойствами, можно определить, какова реакция клеточного сока. Для этого под покровное стекло вводят каплю щелочи, например, NH₄OH. Если окраска препарата изменится, значит, клеточный сок имеет кислую реакцию.

Задание: зарисовать клетку, накопившую краску, плазмолизированную клетку и клетку при действии на нее аммиака, сделать подписи к рисункам и выводы из наблюдений.

Опыт 6. Наблюдение колпачкового плазмолиза

Цель опыта: показать различие свойств плазмалеммы и тонопласта.

Материалы и оборудование: микроскоп, предметные и покровные стекла, скальпель или нож, пинцет, препаровальная игла, фильтровальная бумага, 1М раствор KCNS, 0,01%-ного водный раствор нейтрального красного, раствор NH₄OH.

Растения: окрашенный лук (Allium cepa).

Колпачковый плазмолиз возникает под действием солей, проникающих через плазмалемму в мезоплазму и вызывающих её набухание. Сквозь тонопласт за время опыта соли не проникают.

Ход работы: срез эпидермиса выпуклой стороны чешуи окрашенного лука поместить на предметное стекло в каплю 1 М раствора KCNS и накрыть покровным стеклом. Следить, чтобы на срезе были клетки, содержащие в клеточном соке антоциан. Препарат рассмотреть под микроскопом сначала на малом увеличении (окуляр х15, объектив х8), а затем – на большом (окуляр х15, объектив х40).

Поскольку взят гипертонический раствор, во всех клетках будет наблюдаться сильный плазмолиз. Слой протоплазмы, окружающий вакуоль, имеет заметную толщину. Со стороны поперечных стенок протоплазма имеет вид колпачков на полюсах.

Задание: зарисовать клетку в состоянии колпачкового плазмолиза, сделать вывод о проницаемости мембран протоплазмы.