Качественная реакция на кровяные пигменты.

Появление в моче форменных элементов крови (гематурия) или кровяных пигментов (гемоглобинурия) относится к патологии и может быть обнаружено с помощью ряда проб (гваяковой, бензидиновой и др.). Гематурия имеет место при нарушении целостности кровеносных сосудов, повреждении мочеполовых путей (мочевые камни, рак мочевого пузыря); гемоглобинурия наблюдается при отравлении гемолитическими ядами, при ожогах происходит разрушение эритроцитов. Кровяные пигменты можно открыть бензидиновой пробой, которая основана на окислении бензидина атомарным кислородом, который образуется при разложении перекиси водорода кровяным пигментом, моча окрашивается в синий или зеленый цвет.

Проба с бензидином

В пробирку налить 1 мл прокипяченной мочи, добавить 4 капли 5% раствора бензидина в ледяной уксусной кислоте (свежеприготовленный) и 4 капли 3% раствора перекиси водорода. После перемешивания жидкость окрашивается в синий или зеленый цвет, что указывает на присутствие крови в моче.

Проба гваяковой смолой

Налить в пробирку 1 мл исследуемой мочи. В другую пробирку добавить 1 мл 2% раствора гваяковой смолы, туда же добавить 3 - 5 капель 1% раствора перекиси водорода и осторожно наслоить в пробирку раствор, содержащий мочу. При наличии кровяных пигментов отметить появление синего кольца на границе наслаивания.

Качественное определение желчных пигментов.

Желчные пигменты (билирубин, биливердин и др.) образуются при распаде гемоглобина эритроцитов и появляются в моче при желтухах . Моча, содержащая желчные пигменты, имеет желтовато-коричневое или зеленое окрашивание (характерный признак желтухи).

Проба на билирубин с раствором йода (проба Розина)

К 3 мл мочи осторожно наслоить 1% спиртовый раствор йода или раствор Люголя. При наличии билирубина на границе между обеими жидкостями образуется зеленое кольцо. С нормальной мочой проба отрицательна.

Проба Гмелина на желчные кислоты

К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно по стенке наслоить мочу равный объем. При наличии желчных пигментов на границе наслаивания образуется зеленое кольцо.

Проба Петенкофера на желчные кислоты.

Реакция основана на конденсации желчных кислот с оксиметилфурфуролом, образующимся под влиянием концентрированной серной кислоты из сахарозы. Продукт конденсации имеет красно-фиолетовую окраску.

В пробирку поместить 1 мл мочи добавить 5 капель 5% раствора сахарозы и осторожно по стенке пробирки наслоить 1 мл концентрированной серной кислоты. При наличии желчных кислот на границе наслаивания образуется кольцо красно-фиолетового цвета.

Проба Яффе на уробилин.

К 2 мл мочи прибавить небольшую порцию раствора хлористого цинка. При встряхивании появляется хлопьевидный осадок, который растворить в концентрированном растворе аммиака (около 1мл). В норме появляется слабо-зеленая флюоресценция, ярко выраженная при патологии.

Качественное определение индикана в моче.

Индикан - калиевая или натриевая соль индоксилсерной кислоты - содержится в нормальной моче в виде следов. Много индикана содержится в моче травоядных животных, а также в моче человека при усиленном гниении белков в кишечнике, при запорах и непроходимости кишечника.

В пробирку налить 4 мл исследуемой мочи и прибавить при помешивании равный объем серной кислоты. Затем добавить около 1 мл хлороформа, 1 - 2 капли раствора перманганата калия, закрыть пробкой и несколько раз перевернуть, не встряхивая. Пробирку поставить в штатив и наблюдать интенсивность окрашивания хлороформного слоя в синий цвет

Физико-химическое исследование мочи.

Удельный вес ______________________________

Цвет_______________________________________

Прозрачность_______________________________

рН________________________________________

Химическое исследование мочи.

а) Нормальные составные части.

Кальций___________________________________

Магний____________________________________

Сульфаты__________________________________

Мочевина__________________________________

Креатинин__________________________________

б) Патологические составные части.

Сахар______________________________________

Белок (при обнаружении белка необходимо сделать количественное определение его)_______________________________

Ацетоновые тела____________________________

Кровяные пигменты_________________________

Желчные кислоты___________________________

Билирубин_________________________________

Уробилин__________________________________

Индикан____________________________________

Вывод:__________________________________________________

14. Определение содержания кальция в сыворотке крови.

Нормальный уровень этого элемента в сыворотке (плазме) крови практически здоровых людей составляет 2,0.2,75 ммоль/л. У здоровых новорожденных нижний предел концентрации кальция равен 1,75 ммоль/л, у недоношенных детей – 1,25 ммоль/л.

Повышение уровня кальция (гиперкальциемия) в сыворотке крови наблюдается при увеличении его поступления в кровь из резорбцируемой костной ткани или из пищи в условиях снижения почечного клиренса. Более 90% случаев гиперкальциемии обусловлено первичным гиперпаратиреозом и злокачественными новообразованиями.

Снижение концентрации кальция (гипокальциемия) в сыворотке крови отмечается гораздо чаще, чем гиперкальциемия, и происходит по целому ряду причин, а именно:

• гипопаратиреоз, развитие которого наблюдается при нарушении функций паращитовидных желез, например, в результате повреждения при операциях на щитовидной железе;
• псевдогипопаратиреоз – наследуемая резистентность органов-мишеней к паратгормону;
• нарушения всасывания или повышенного выведения кальция (синдром мальабсорбции);
• дефицит витамина D;
• тубулопатия (заболевания почек, сопровождающиеся нарушениями реабсорбции кальция в почечных канальцах);
• острая и хроническая почечная недостаточность;
• гипоальбуминемия;
• острый алкалоз.

Принцип метода. Использование флуорексона для комплексоно-метрического определения кальция основано на том, что его водные растворы в силыющелочной среде не флуоресцируют, по в этих же условиях флуорексон образует с кальцием флуоресцирующие комплексы. Комплекс индикатора с металлом менее прочен, чем комплекс металла с трилоном Б, поэтому по мере добавления последнего к раствору, содержащему металл и индикатор, происходит постоянный переход ионов металла к три-лону Б. При титровании трилоном Б в точке эквивалентности отмечается резкое «затухание» флуоресценции.
15. Определение активности каталазы крови по Л.И Баху и С.Р. Зубковой.

Количественное определение активности каталазы крови методом А.Н. Баха и С.Р. Зубковой.

Принцип метода.Метод основан на титровании избытка перекиси водорода, нерасщепленного каталазой, перманганатом калия в кислой среде.

5Н₂О₂ + 2КМnО₄ + 3Н₂SО₄ → 8Н₂О + 5О₂ + К₂SО₄ + 2MnSО₄

Активность каталазы выражается каталазным числом, которое представляет собой количество перекиси водорода в миллиграммах, разложенной 1 мл³ крови за 30 минут. Показателем каталазы называют соотношение каталазного числа к количеству миллионов эритроцитов в 1 мкл исследуемой крови.

Показатели нормы.Каталазное число крови у людей колеблется в пределах от 11 до 20 единиц. В клинике чаще используется показатель каталазы, который в норме составляет 2-3×10^-6.

Клинико-диагностическое значение.Высокая активность каталазы наблюдается при пернициозной и макроцитарной анемии, а также при введении в организм кофеина, ацетоновых тел, алкоголя. Активность каталазы в крови снижается при ряде заболеваний: раке, анемии, туберкулезе и др

16. Количественное определение содержания гемоглобина крови.