Определение химических компонентов нормальной мочи.

Качественное определение хлоридов

Налить в пробирку 1 мл мочи, добавить 2 - 3 капли 30% раствора азотной кислоты и 3 - 4 капли 1% раствора азотнокислого серебра. Образуется творожистый осадок хлорида серебра. Написать реакцию.

Качественное обнаружение сульфатов

К 1 мл мочи добавить 2 - 3 капли 1% раствора уксусной кислоты и 2 - 3 мл раствора хлористого бария. Выпадает нерастворимый осадок сульфата бария. Написать реакцию.

Обнаружение фосфатов

В пробирку налить 1 мл молибденового реактива и нагреть его до кипения. После этого прибавить 5 - 6 капель мочи. Выпадает желтый кристаллический осадок фосфорно-молибденовокислого аммония, нерастворимый в азотной кислоте, но растворимый в аммиаке.

Обнаружение ионов кальция

К 1 мл мочи добавить 1 - 2 капли 3% раствора уксусной кислоты и 1 - 2 капли раствора щавелевокислого аммония. Выпадает осадок щавелевокислого кальция (кристаллы под микроскопом имеют вид конвертиков). Написать реакцию.

Обнаружение аммиака

В пробирку налить 2 мл мочи, добавить равный объем раствора гидроксида кальция и над пробиркой держать смоченную водой красную лакмусовую бумажку. Через некоторое время бумажка синеет от выделяющегося аммиака.

Обнаружение креатинина (реакция Вейля)

К 1 мл мочи добавить 1 мл 10% раствора гидроксида натрия и 2 капли 10% раствора нитропруссида натрия, появляется красное окрашивание, которое впоследствии переходит в желтое.

Патологические компоненты мочи.

Качественное определение белка.

Белок мочи состоит из сывороточного альбумина и глобулинов. Кроме того, на белок дает реакцию моча, содержащая кровь и гной. Белок в моче обнаруживается с помощью реакций осаждения.

В нормальной моче содержится незначительное количество белка (0,05-0,15 г/сут), что не обнаруживается обычными качественными пробами. Белок в моче обнаруживается при нефрозе, нефрите, сердечной декомпенсации и при некоторых других патологиях. Пробы на белок мочи основаны на его денатурации различными агентами.

Проба кипячением

2 - 3 мл мочи (профильтрованной, если она щелочная, то ее подкисляют уксусной кислотой до слабокислой реакции) довести до кипения и добавить 2 - 3 капли уксусной кислоты. Появление осадка, не растворяющегося при прибавлении кислоты, указывает на присутствие в исследуемой моче белка. Осадки фосфатов и карбонатов кальция и магния растворяются в более кислом растворе.

Проба Геллера

К 1 мл концентрированной азотной кислоты осторожно, держа пробирку наклонно, наслоить 1 мл профильтрованной мочи (лучше наслаивать мочу пипеткой). На границе двух слоев при наличии белка появляется белое кольцо.

Проба с сульфосалициловой кислотой

К 1 мл профильтрованной мочи прилить 3 - 4 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Появление осадка или мути указывает на присутствие белка.

Примечание!Избыток сульфосалициловой кислоты может привести к растворению.

Качественное определение сахара в моче с помощью реактива Фелинга.

В норме в моче содержится 0,2-0,4 г/л глюкозы и она не обнаруживается обычными реакциями. При диабете и некоторых других заболеваниях, а также после обильного приема с пищей углеводов, эмоционального стресса, при отравлениях эфиром, оксидом, хлороформом, поражения почек он в значительных количествах появляется в моче.

В пробирку налить 1 - 2 мл мочи, добавить равный объем реактива Фелинга и осторожно нагреть верхний слой жидкости. При наличии сахара отметить выпадение кирпично-красного осадка.

Качественное обнаружение сахара в моче при помощи индикаторной бумаги «Глюкотест».

«Глюкотест» приготавливается путем пропитки полосок фильтровальной бумаги размером 0,5×5см смесью, содержащей глюкозооксидазу, пероксидазу и краситель. При смачивании бумаги раствором, содержащим глюкозу, происходит окисление глюкозы под действием фермента глюкозооксидазы. Образующаяся при этом перекись водорода разлагается ферментом пероксидазой с окислением содержащего в тесте красителя. Интенсивность изменения окраски в определенной степени пропорциональна содержанию глюкозы в растворе, поэтому «Глюкотест» используется и для полуколичественного определения содержания глюкозы в моче (от 1,0 до 2,0 г/л и выше).

Бумажку «Глюкотеста» погрузить в исследуемую мочу так, чтобы нанесенная на бумажку желтая полоса была смочена. Немедленно извлечь бумажку, положить смоченным концом на пластмассовую пластинку и через 2 мин сравнить изменившуюся окраску цветной полосы со шкалой, имеющейся в комплекте. Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.

Количественное определение белка в моче по методу Робертса-Стольникова.

При наличии в моче белка, открытого качественными реакциями, его количество определяют методом Робертса-Стольникова. В основе метода лежит проба Геллера – денатурация белка азотной кислотой. Экспериментально установлено, что при наслаивании на азотную кислоту, растворы, содержащие 0,0033% белка, дают белое колечко в промежутке между второй и третьей минутами после наслаивания. Если колечко появляется непосредственно после наслаивания раствора белка на азотную кислоту, то путем последовательного разведения исследуемого материала достигают такого максимального разведения, при котором появляется кольцо между второй и третьей минутами. Умножая разведение на 0,0033%, получаем процентное содержание белка в моче.

Качественное определение кетоновых тел.

В нормальной моче кетоновые тела (ацетон, ацетоуксусная и b-гидроксимасляная кислоты) содержатся в небольших количествах (0,02-0,05 г/сут, или 20-50 мг) и обычными качественными реакциями не обнаруживаются. Повышенная экскреция их с мочой (кетонурия) наблюдается при сахарном диабете (до 10-50 г/сут), голодании, инфекционных заболеваниях (туберкулезе и др.)

Проба с нитропруссидом натрия (Легаля) на ацетон

При взаимодействии ацетона с нитропруссидом натрия в щелочной среде появляется оранжево-красное окрашивание. После подкисления концентрированной уксусной кислотой оранжево-красное окрашивание переходит в вишневое.

В пробирку налить 1 мл мочи и добавить 2 - 3 капли свежеприготовленного раствора нитропруссида натрия и 3 - 4 капли 10% раствора едкого натра. После развития оранжево-красной окраски прилить несколько капель концентрированной уксусной кислоты и отметить изменение цвета раствора в вишневый.

Проба Либена на ацетон

Проба основана на образовании йодоформа СНI₃ при взаимодействии ацетона с I₂ в щелочной среде.

К 1 мл мочи добавить 3 - 4 капли 10% раствора КОН и по каплям - раствора йода в йодистом калии (раствор Люголя) до появления мути (слабо-желтый кристаллический осадок йодоформа) при наличии ацетона, обладающего специфическим «больничным» запахом.

СНз-С-СН₃ + 2I₂ + 4NаОН —® СНI₃ + CH₃COONa + 3NaI + 3Н₂О

    êê

    О

К 1 мл мочи добавить 4 - 5 капель 5% раствора FеСl₃. Наблюдается вишнево-красное окрашивание за счет комплексного соединения железа с енольной формой ацетоуксусной кислоты, постепенно бледнеющее при стоянии вследствие самопроизвольного декарбоксилирования ацетоуксусной кислоты:

СНз-С-СН₂СООН —® СН₃-С-СН₃ + СО₂

    êê                                êê

   О                                О