Определение качественного состава бактерий по культуральным и морфологическим признакам

Из каждой группы колоний, выросших на плотных средах, го­товят препарат и определяют по форме клеток, к какому роду микроорганизмов они относятся.

Из общего числа микроорганизмов, развивающихся на МПА, можно выделить следующие роды: Pseudomonas, Flavobacterium, Bacillus, Micrococcus, Sarcina, Mycobacterium, Actinomyces.

Род Pseudomonas.На МПА микроорганизмы этого рода формируют колонии: круглые, неправильной формы, плоские и выпуклые, слизистые и пастообразные, просвечивающие, бесцветные или пигментированные (грязно-белые, синие, сине-зеленые, красные, желтые, бурые и черные).

Характерная особенность представителей рода - образование сине-зеленого или желто-зеленого флуоресцирующего пигмента. Некоторые колонии удается наблюдать только в ультрафиолетовых лучах. У других видов пигменты диффундируют в среду, окрашивая ее в соответствующий цвет. Образование определенного пигмента зависит от состава и реакции среды.

Клетки Pseudomonas прямые или слегка изогнутые, часто с заостренными концами. Они располагаются одиночно, парами или короткими цепочками. Размеры клеток 1,5-4 0,5-1 мкм. Двигаются эти организмы при помощи жгутиков (монотрихи или лофотрихи), не образуют чехлов; для них неизвестны стадии покоя. Бактерии Pseudomonas - аэробы, но ванаэробных условиях способны использовать для дыхания кислород нитратов. Клетки грамотрицательные.

Род Flavobacterium.На МПА дают выпуклые или слабо выпуклые округлые колонии диаметром 2-3 мм с цельным краем, чаще гладкие и блестящие, прозрачные, желтого цвета за счет каротиноидных пигментов, не диффундирующих в среду, встречаются желтовато-оранжевые колонии, иногда и красные.

Клетки палочковидной формы (0,5 1,0-3,0 мкм) с закругленными концами, неподвижны. Располагаются флавобактерии одиночно, парами и в виде коротких цепочек, иногда - в виде нити. Эндоспор не образуют. Грамотрицательные.

Род Micrococcus.На МПА, как правило, образуют колонии мелких и средних размеров (диаметр 2-4 мкм). Колонии могут быть: матовые, блестящие, маслянистые; гладкие, выпуклые, плоские; зернистые, мелкоскладчатые; пастообразной слизистой консистенции, иногда встречаются сухие плотные; цвет колоний возможен белый, серый, реже колонии бесцветные, встречаются буроватые, обычно - желтые, розовые или красные. Пигменты в среду не диффундируют. Клетки  мелкие (диаметр 0,2-1,5 мкм), одиночные, могут встречаться пары, тетрады или скопления неправильной формы. Клетки неподвижные, не образуют эндоспор. Грамположительные.

Род Sarcina. Колонии средних размеров, круглые, компактные, выпуклые, плоские; гладкие, бугристые или складчатые, зернистой структуры; матовые или жирно-блестящие; желтые, лимонно-желтые, иногда розовые, красные, белые. Клетки сферические (диаметр 1,8-3 мкм), соединены в пакеты. Пакет объемный - куб, состоит из 8 клеток, поскольку образуется при делении клетки в трех взаимно перпендикулярных плоскостях. Под микроскопом пакет выглядит состоящим из четырех клеток (одна сторона куба). Есть сарцины, у которых пакеты уложены упорядоченно по четыре, и под микроскопом они смотрятся как большие тюки, состоящие из четырех пакетов.

Род Mycobacterium.Относится к группе микобактерии. На МПА микобактерии растут медленно или очень медленно. Они образуют мелкие, круглые компактные колонии, иногда приподнятые; мягкие, пастообразной или слизистой консистенции (растекающиеся по субстрату), бывают сухие крошащиеся, бугристые складчатые; матовые, блестящие, бесцветные или окрашенные (розовые, оранжевые, желтые, зеленые, синие, бурые, черные). Пигмент в среду не выделяют. Молодые клетки - ветвистые или угловатые с неправильными контурами (3,0-7,0 0,7 мкм); с возрастом у большинства видов клетки распадаются на кокки и палочки. Большинство видов грамположительные.

Род Bacillus.Палочковидные бактерии, способные образовывать более или менее термоустойчивые споры. Во время формирования споры палочковидная форма клеток сохраняется. По характеру роста колоний на МПА (или МПА + сусло-агар) можно иногда определить видовую принадлежность бацилл. Клетки грамположительные. Аэробы.

В. megaterium - земляная палочка (от лат. terra — земля, почва). Колонии гладкие, белые, выпуклые, жирно-блестящие, редко - складчатые (рис. 3); края колоний резко очерчены или волнисто-бахромчатые. Споры овальные или цилиндрические, не шире материнской клетки, в поперечнике достигают 2 мкм. Длина клеток – 5-7 мкм и более.
	Рис. 3 Bacillus megaterium. Колонии на МПА (верхний рисунок), клетки культуры под микроскопом (верхний рисунок)

 В. subtilis(от лат. sub — внутри или под, tilia — липа, трава, впервые выделена из сена) - сенная палочка. Колонии сухие мелкоморщинистые, бархатистые; бесцветные или розовые; срастающиеся с агаром; край колоний волнистый или слегка волнистый. Палочки короткие тонкие – 3-5 0,9 мкм. Споры овальные (0,9 0,6 мкм), расположены не строго центрально, на некоторых средах - ближе к центру. Клетки подвижные (перитрихи).

В. mesentericus - картофельная палочка. Название связано не с картофелем, а с картофельной болезнью хлеба, которую она вызывает. Появляется картофельная палочка на качественном пшеничном хлебе при хранении его в течение нескольких дней в теплом месте при повышенной влажности, вызывая разрушение белковых веществ и крахмала. При ее интенсивном развитии внешние признаки мякиша изменяются: при разломе он становится тянущимся и липким, появляется затхло-гнилостный, иногда с примесью сладковатого, запах. Колонии на МПА тонкие, сухие, морщинистые, серовато-белые. Палочки тонкие, длинные и короткие; подвижные (3-10 0,5-0,6 мкм); иногда они соединены в длинные нити. Споры овальные и продолговатые (0,9-0,5 мкм). При формировании спор клетки не меняют палочковидной формы. Прорастание спор экваториальное.

В. mycoides - грибовидная палочка. Образует колонии, напоминающие рост гриба: ризоидные или мицелевидные, стелющиеся по поверхности агара(рис. 4). Пучки нитей отходят от края колоний, создавая иллюзию ветвления; нити изгибаются направо или налево, образуя право- или левовращающиеся формы колоний. Клетки в поперечнике - 0,8-1,2 мкм, по длине в зависимости от среды – 5-7 мкм, часто 10 мкм и более. Цитоплазма вакуолизирована, с гранулами запасных питательных веществ. Формы подвижные (перитрихи). Вид имеет много вариантов. Клетки грамположительные.
	Рис. 4Bacillus mycoides. Колонии на МПА (верхний рисунок), клетки культуры под микроскопом (верхний рисунок)

В. cereus(от лат. сеra - восковой) — колонии восковидные, толстые, компактные, матовые со складчатым центром и ризоидными волнистыми краями; иногда мелкобугристые, с бахромчатыми краями, от которых отходят тонкие сплетения нитей. Клетки толстые, диаметром 1-1,5 мкм, длиной 3- 5 мкм, иногда и более; одиночные или соединены в цепочки, нити. Споры овальные (1,2-1,5 0,9 мкм), расположены субтерминально, прорастают полярно.

В. idosus (от лат. idos - образ, вид) - колонии сухие, матовые, плоские, мелкоморщинистые, легко и целиком снимающиеся иглой с поверхности агара. Клетки - тонкие прямые палочки (2-3 0,6 мкм), подвижные. Споры овальные, чаще образуются в центральной части клеток.