Методы приготовления препаратов микроорганизмов

Для изучения морфологии микроорганизмов готовят препараты и просматривают их под микроскопом.

Исследование живых микроорганизмов осуществляют методами раздавленной и висячей капли. В обоих случаях окрашивание объекта проводят прижизненными красителями - так называемая витальная окраска. Прижизненными красителями могут служить метиленовый синий, нейтральный красный в концентрациях от 0,001 до 0,0001%.

В случае использования метода раздавленной капли на чистое предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. В нее вносят культуру и смешивают с водой. Накрывают каплю покровным стеклом так, чтобы под ним не образовывались пузырьки воздуха. Избыток воды удаляют фильтровальной бумагой, поднося ее к краям покровного стекла.

Для метода висячей капли требуется специальное предметное стекло с лункой посередине. На стерильное покровное стекло наносят иглой негустую суспензию микроорганизмов, выросших в жидкой питательной среде или заранее подготовленных для этой цели. Так, при выращивании на плотных средах микроорганизмы предварительно разводят в физиологическом растворе (0,5% NaCl). Покровное стекло переворачивают и помещают на стерильное предметное стекло с лункой так, чтобы капля свободно свисала в лунку.

Фиксированные препараты. Под фиксацией подразумевается такая обработка живого объекта, которая дает возможность быстро прервать течение жизненных процессов в объекте, сохранив его тонкую структуру. В результате фиксации клетки прочно прикрепляются к стеклу и лучше прокрашиваются. Фиксация обязательна при работе с патогенными микроорганизмами.

Приготовление фиксированного препарата. На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю водопроводной воды. Для обезжиривания стекла используют этиловый спирта и серный эфира в соотношении 1:1. Прокаленной бактериологической петлей из пробирки с культурой или с поверхности среды из чашки Петри берут небольшое количество микробной массы и вносят в каплю воды. Каплю тщательно размазывают петлей по стеклу на поверхности около 4 см². Затем мазок сушат на воздухе при комнатной температуре. Высушенный препарат фиксируют. Для этого стекло три-четыре раза медленно проводят нижней стороной над пламенем горелки. Зафиксированный препарат окрашивают. При окрашивании мазка препарат помещают в препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. По окончании окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют воду, подсушивают на воздухе и микроскопируют.

Существуют простые и дифференцированные методы окраски. При простой окраске используют какой-либо один краситель, например, метиленовый синий, фуксин, генциан фиолетовый. При этом окрашивается вся клетка.

При диффенцированной окраске отдельные структуры клетки окрашиваются разными красителями.

Определение численности микроорганизмов

В природных средах