Правила работы в микробиологических лабораториях.

ЛАБОРАТОРНАЯ РАБОТА 1

Тема:МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЛАБОРАТОРИЯ. МЕТОДЫ ИЗУЧЕНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. МОРФОЛОГИЯ МИКРОБОВ.СТРУКТУРА БАКТЕРИАЛЬНОЙ КЛЕТКИ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ. ПРОСТЫЕ И СЛОЖНЫЕ МЕТОДЫ ОКРАСКИ.

Цель занятия:ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории, с методами изучения микроорганизмов; освоить технику иммерсионной микроскопии; технику приготовления мазков из культур микроорганизмов и окраски мазков-препаратовпростыми методами.

Изучить структурные особенности прокариотических микроорганизмов, овладеть сложными методами окраски для выявления структурных компонентов бактериальной клетки.

Вопросы для подготовки к занятию

1. Микробиологическая лаборатория. Оборудование, правила работы, организация рабочего места.

2. Методы изучения микроорганизмов (микроскопический, бактериологический, экспериментально-биологический, серологический, кожно-аллергический, молекулярно-генетический).

3. Микроскопический метод исследования. Виды современных микроскопов. Иммерсионная микроскопия.

4. Принципы классификации микробов. Классификация бактерий по Берджи. Современные подходы к систематике микроорганизмов. Таксономические категории: царство, отдел, семейство, род, вид. Популяция, культура, штамм, клон. Определение, применение в теоретической и прикладной микробиологии.

5. Морфология бактерий. Классификация бактерий по морфологии (кокковидные, палочковидные, извитые, ветвящиеся), размер и взаимное расположение бактерий.

6. Тинкториальные свойства бактерий. Этапы приготовления мазков-препаратов.

7. Простые (метиленовой синькой и фуксином)методы окраски

8. Особенности строения бактериальной клетки (см. Атлас А.А.Воробьевастр 28, рис 3,4) и ее отличия от клеток высших организмов.

9. Основные структуры: клеточная стенка, цитоплазматическая мембрана, цитоплазма, нуклеоид (строение и химический состав).

10. Понятие о сложных методах окраски.

11.  Особенности строения клеточной стенки бактерий. Грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы. Окраска по Граму, принцип и этапы окраски, значение для классификации бактерий

12. Механизм, этапы и результат окраски кислотоустойчивых бактерий по методу Циля-Нильсена. Механизм, этапы и результат окраски по Нейссеру, Бурри-Гинсу, Ожешке (Ауески), Романовскому-Гимзе 

13. Капсула бактерий, ее назначение, методы выявления.

14.  Жгутики, строение, функции, методы выявления Исследование микробов в живом состоянии. Характеристика методов «висячей» и «раздавленной» капли.

15. Включения у бактерий, их выявление.

16. Споры бактерий, функции, методы выявления.

17. Бактериоскопический метод диагностики.

Оформление протокола лабораторных занятий (выполнить дома)

1. Записать в тетрадь для лабораторных работ:

- номер занятия, тему и цель занятия.

- определение понятий: семейство, род, вид, чистая культура, штамм, клон.

- виды микроскопии (принцип, назначение)

- значение и способы фиксации мазков.

2. Вклеить таблицу «Основные формы бактерий» (см. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологииБыков А.С.Воробьев А.А.Зверев В.В. рис. 3.2). 

3. Нарисовать схематическое строение клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий (см. Атлас А.А.Воробьева, рис. 3.5).

Заполнить в тетради таблицы 2.1.Отличительные признакиграмположительных и грамотрицательных микроорганизмов(см. Атлас А.А.Воробьевастр 20)и 2.2.(см. Атлас А.А.Воробьева 2008 год).

Задания для выполнения лабораторной работы

1.  Для допуска к выполнению лабораторной работы индивидуально под подпись ответить «Правил работы в микробиологической лаборатории».

2. Ознакомиться с оборудованием микробиологической лаборатории кафедры МВИ.

3. Приготовить мазок из кисломолочного продукта, окрасить метиленовым синим или фуксином Пфейффера, изучить под микроскопом.

4. Приготовить мазок из материала, окрасить по методу Грама, изучить под микроскопом.

5. Приготовить мазок из материала, окрасить по методу Бурри-Гинса, изучить под микроскопом

6. Записать ход работы по приготовлению и микроскопии выполненных мазков, зарисовать препараты (или цветные фото) и сделать заключение.

Дополнительный материал

ЧАСТЬ 1

СП1.3.2322-08. Требования к помещениям и оборудованию микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп(некоторые пункты).

1. Микробиологические лаборатории, где проводят работы с ПБА III - IV групп, должны размещаться в отдельно стоящем здании или в изолированной части здания. На входной двери лаборатории должны быть обозначены название (номер) лаборатории и международный знак "Биологическая опасность". Размещение лабораторий в жилых зданиях не допускается.

   2. Производственные лаборатории, проводящие работу с ПБА III группы, должны располагаться в отдельно стоящих зданиях или изолированном блоке здания, имеющем отдельный вход, а производственные лаборатории, работающие с ПБА IV группы, могут располагаться в изолированном блоке производственного корпуса.

3. Лаборатория должна быть обеспечена холодным и горячим водоснабжением, канализацией, электричеством, отоплением и вентиляцией. Все помещения лаборатории должны иметь естественное и искусственное освещение в соответствии с требованиями действующих нормативных документов.

4. Объемно-планировочные решения и размещение оборудования должны обеспечивать поточность движения ПБА III - IV групп, персонала и выполнение требований санитарных правил (СП1.3.2322-08).

  5. Помещения лабораторий разделяют на "заразную" зону, где осуществляются манипуляции с ПБА III - IV групп и их хранение, и "чистую" зону, где не проводят работы с микроорганизмами и их хранение.

В "чистой" зоне лабораторий должны располагаться следующие помещения:

- гардероб для верхней одежды;

- помещения для проведения подготовительных работ (препараторская, моечная, приготовление и разлив питательных сред и др.);

- помещение для стерилизации питательных сред и лабораторной посуды (стерилизационная);

- помещение с холодильной камерой или холодильниками для хранения питательных сред и диагностических препаратов;

- помещение для работы с документами и литературой;

- помещение отдыха и приема пищи;

- кабинет заведующего;

- помещение для хранения и одевания рабочей одежды;

- подсобные помещения;

- туалет.

Для работы с ПБА III - IV групп в "заразной" зоне должны размещаться:

- помещение для приема и регистрации материала (проб);

- боксированные помещения с предбоксами или помещения, оснащенные боксами биологической безопасности:

для проведения бактериологических (вирусологичеких) исследований;

для проведения иммунологических исследований;

- помещение для люминесцентной микроскопии;

- помещение для проведения зооэнтомологических работ;

- помещение для гельминтологических исследований;

- помещение для работы с лабораторными животными (заражение, вскрытие);

- помещение для содержания инфицированных лабораторных животных;

- помещения для ПЦР-диагностики;

- термостатная комната;

- помещение для обеззараживания (автоклавная).

6. На границе "чистой" и "заразной" зон должен располагаться санитарный пропускник.

7. При расположении в одном блоке нескольких микробиологических лабораторий общими для них могут быть: блок для работы с инфицированными животными, автоклавные для обеззараживания, моечные, комнаты для приготовления питательных сред и другие вспомогательные помещения.

8. Внутренняя отделка помещений должна быть выполнена в соответствии с их функциональным назначением и гигиеническими нормативами. Поверхность пола, стен, потолка в лабораторных помещениях "заразной" зоны должна быть гладкой, без щелей, устойчивой к многократному действию моющих и дезинфицирующих средств. Полы должны быть не скользкими, иметь гидроизоляцию.

9. Окна и двери помещений "заразной" зоны лаборатории должны быть герметичными. Допускается заполнение оконных проемов стеклоблоками. Окна цокольного и первого этажей независимо от наличия охранной сигнализации должны быть оснащены металлическими решетками, не нарушающими правил пожарной безопасности. Двери должны иметь запирающие устройства.

10. Приборы, оборудование и средства измерений, используемые в работе лаборатории, должны быть аттестованы, технически исправны, иметь технический паспорт и рабочую инструкцию по эксплуатации с учетом требований биологической безопасности. Средства измерения подвергают метрологическому контролю в установленные сроки.

11. Лабораторное оборудование и мебель (столы, стеллажи для содержания животных, стулья и т.д.) должны быть гладкими, без острых краев и шероховатостей и иметь покрытие, устойчивое к действию моющих и дезинфицирующих средств. Поверхность столов не должна иметь швов и трещин. В помещениях "заразной" зоны не допускается использование мебели из древесины и с мягким покрытием.

12. Помещения "заразной" зоны должны быть оборудованы бактерицидными облучателями для обеззараживания воздуха и поверхностей в соответствии с нормативами.

13. В лабораторных помещениях должна быть предусмотрена защита рабочих столов от попадания прямого солнечного света. Для этих целей могут быть использованы светозащитная пленка, жалюзи из материала, устойчивого к воздействию дезинфицирующих растворов.

14. Все жидкие отходы, образующиеся в процессе работы в "заразной" зоне, перед сбросом в канализационную систему подлежат обязательному химическому или термическому обеззараживанию.

15. Помещения блока для работы и содержания инфицированных животных, бокси-рованные помещения, микробиологические комнаты, помещения с аэрозольными камерами (установками) должны быть оборудованы автономными системами приточно-вытяжной вентиляции с механическим побуждением. Указанные системы оснащаются фильтрами тонкой очистки на выходе, проверяемыми на защитную эффективность. В отдельных случаях для создания асептических условий в помещениях фильтрами тонкой очистки могут оснащаться и приточные системы вентиляции.

16. Не допускается подводка систем горячего и холодного водоснабжения и канализации в микробиологические боксы.

17. Для обеспечения физической защиты работающего персонала, воздуха и поверхностей рабочей зоны, окружающей среды от исследуемых микроорганизмов должны использоваться боксы биологической безопасности.

18. Для работы с ПБА должны применяться боксы биологической безопасности II класса. Все работы в боксах биологической безопасности проводят на поддонах с салфетками, смоченными дезинфицирующим раствором.

19. Боксы биологической безопасности должны проверяться на защитную эффективность. При проверке должна определяться эффективность работы фильтров очистки воздуха, скорость воздушного потока в рабочем проеме бокса.

Правила работы в микробиологических лабораториях.

Работу в микробиологической лаборатории медицинского учреждения проводят с возбудителями инфекционных заболеваний ­­— патогенными микроорганизмами. Поэтому для предохранения от заражения персонал обязан строго соблюдать правила внутреннего распорядка.

1. Все сотрудники должны работать в медицинских халатах, шапочках и сменной обуви. Вход в лабораторию без халата категорически воспрещен. В необходимых случаях работающие надевают на лицо маску. Работа с особо опасными микробами регламентируется специальной инструкцией и проводится в режимных лабораториях.

2. В лаборатории, на рабочем месте, запрещается принимать пищу, пользоваться косметикой, курить.

3. Рабочее место должно содержаться в образцовом порядке. Личные вещи сотрудников следует хранить в специально отведенном месте.

4.  Любой поступивший в лабораторию материал рассматривается как потенциально инфицированный патогенной микрофлорой.

5.  Весь поступивший материал регистрируется в специальном журнале, где ему присваивается порядковый номер, которым маркируются соответствующие пробирки и чашки Петри на всем протяжении исследования в лаборатории.

6. Материал высевают в пробирки и чашки Петри вблизи пламени горелки с обязательным обжиганием бактериологической петли и краев пробирки во избежание бактериологической обсеменённости воздуха в рабочем помещении.

7. С поступившим в лабораторию материалом работают только с помощью инструментов (бактериологические петли, пинцеты, шпатели, пипетки и др.)

8.  Загрязненный инструментарий (пипетки, стеклянные палочки, шпатели) сразу после использования погружается в емкости с дез. раствором.

9.  Бактериальная петля после использования сразу же обеззараживается путем фламбирования (прожигания) в пламени спиртовки и ставится в штатив.

10. Прикасаться руками к исследуемому материалу запрещается.

11. При случайном попадании инфицированного материала на стол, пол и другие поверхности это место необходимо тщательно обработать дезинфицирующим раствором.

12. Хранение, наблюдение за культурами микробов и их уничтожение должны производиться согласно специальной инструкции. Культуры патогенных микробов регистрируют в специальном журнале.

13. По окончании работы рабочий стол и руки следует обработать дезинфицирующим раствором (70% этиловый спирт) затем руки тщательно вымыть мылом.

Используемые методы дезинфекции:

· Руки (а также рабочие поверхности, контактировавшие с исследуемым материалом) обрабатывают дезинфицирующим раствором (70% этиловым спиртом или 0,5% раствором хлорамина), а затем моют с мылом.

· Помещение дезинфицируют с помощью бактериологических ламп и путём обработки поверхностей лабораторной мебели дезинфицирующим раствором.