Охарактеризовать все фазы процесса

Заполнить таблицу по основным знаниям физиологии микроорганизмов

Подпись преподавателя______________________________________________________________

Теоретическая справка

к работе № 1

Для культивирования бактерий применяют питательные среды. Они могут быть естественными (молоко, морковь, картофель), искусственными (готовят специально). Питательные среды могут быть жидкие и плотные. В зависимости от свойств микробов используют разные среды. Их делят на 3 группы:

1) простые (универсальные) - на них растут только нетребовательные микробы (стафилококки, кишечная палочка). Это МПА и МПБ - мясопептонный агар и бульон.

2) элективные (избирательные) - на них растет только один вид микробов, а другие – нет. Например: 1% щелочная пептонная вода - для холерного вибриона, сахарныйагар - для стрептококка, кровяно-теллуритовыйагар - для дифтерийной палочки и т.д.

3) дифференциально-диагностические - для отличия одного вида от другого по биохимической активности (среды Эндо, Гисса и т.д).

Требования к питательным средам:

- питательность,

- изотоничность,

- буферность, оптимальная рН - 7.2 – 7.4

- стерильность,

- влажность,

- унифицированность в отношении основных компонентов

Питательные среды и их состав

Кровяной агар. Используют для выявления экзотоксина – гемолизина у бактерий. К расплавленному и охлажденному до 45°С МПА (2% агара) стерильно добавляют 5-10% дефибринированной стерильно взятой крови лошади, кролика или барана.

Щелочная пептонная вода. Используют для культивирования холерных вибрионов. Основной раствор пептона: пептона - 100 г, хлорида натрия -50 г, нитрата калия - 1 г, карбоната натрия - 25 г, воды дистиллированной - 1 л; рН 9,0. Стерилизуют при 120°С 20 мин. Для получения пептонной воды основной раствор разводят водой в 10 раз, доводят рН до 8,8 -8,9, стерилизуют.

Мясопептонный агар (МПА). Применяют для выращивания большинства бактерий.К готовому МПБ добавляют 2% агар и оставляют для набухания 30 мин. Кипятят до полного растворения агара. Стерилизуют 30 мин при 120°С.

Желточно - солевой агар (ЖСА).Среда содержит повышенные концентрации хлорида натрия (8-10%), которые не препятствуют размножению стафилококков, что обеспечивает элективность среды. Готовят среду из питательного солевого агара. В расплавленный и остуженный до 45 ⁰С агар добавляется куриный желток.

Среда 199. Используют для выращивания культур клеток.Синтетическая среда, содержащая аминокислоты, витамины, глюкозу, минеральные соли. Среду используют с добавлением 5-10% коровьей или лошадиной сыворотки.

Дифференциально-диагностические среды

1.Питательные среды для культивирования и изучения биохимических свойств

1.1. Среды Эндо,Левина, Плоскирева. Используют как дифференциально-диагностические элективные среды для культивирования бактерий кишечной группы (содержит лактозу). Микроорганизмы, ферментирующие находящийся в этих средах молочный сахар (лактозу), образуют окрашенные колонии - лактозоположительные (колонии красного цвета с металлическим блеском или без блеска). Колонии микробов, не ферментирующие лактозу, бесцветные - лактозонегативные – нежно-розовые, прозрачные, пропускающие свет.

К 100 мл МПА (рН 7,6) при температуре 70°С стерильно добавляют 5 мл 20% раствора лактозы и смесь 0,5 мл насыщенного раствора основного фуксина с 1,25 мл свежеприготовленного раствора сульфата натрия.

1.2. Среды с крахмаломиспользуют для выявления микроорганизмов, образующих амилазу. Наличие фермента определяется при добавлении к культуре несколько капель раствора Люголя

(цвет среды не изменяется). Нерасщепленный крахмал дает с этим раствором синее окрашивание.

1.3.Молоко.При росте микроорганизмов, сбраживающих лактозу, свертывается.

2. Коммерческие наборы – для изучения биохимических свойств(идентификации микроорганизмов по сахаролитической и протеолитической активности).

2.1. Среды Гисса с углеводами (глюкоза, лактоза, сахароза, арабиноза и другие) в которых выявляют ферментативную активности микроорганизмов.Под действием образующейся при расщеплении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды. Соломенно-желтого цвета среда при положительной реакции меняет цвет на красный или интенсивно розовый, поэтому эти среды названы «пестрый ряд». Микробы, не ферментирующие данный углевод, растут на среде, не изменяя ее цвета. Наличие газа устанавливают по образованию пузырьков в средах с агаром или по скоплению его в «поплавке» на жидких средах.

Состав: пептон - 10 г, хлорид натрия - 5 г, углевод - 10 г, реактив Андреде (фуксин)- 10 мл, вода дистиллированная до 1000 мл, рН после стерилизации 7,2-7,4.