Оценка дерматотоксичности ксенобиотиков в эксперименте

Особое значение выявление дерматотоксичности имеет при определении переносимости веществ, специально предназначающихся для нанесения на кожу: косметики, детергентов, лекарственных средств и т.д.

В эксперименте эффекты оцениваются путем аппликации ксенобиотика на поверхность кожи. Выделяют четыре категории исследований, направленных на выявление:

- непосредственного раздражающего (прижигающего) действия;

- сенситизирующего действия;

- фототоксичности;

- фотосенситизирующего действия.

Опыты для выявления раздражающего (прижигающего) действия производятся на лабораторных животных, желательно кроликах. На спине животных освобождаются от волос две области, площадью около 5 см². Кожа на одной из областей слегка скарифицируется. На обе поверхности наносят исследуемое вещество в количестве 0,5 мл (г) после чего участки кожи покрывают марлевыми салфетками. Через 24 часа обработанные токсикантом участки кожи осматривают, обращая особое внимание на выраженность эритемы и отека ткани. Степень поражения кожи оценивают в баллах. Через 48 часов исследование повторяют.

Тесты по выявлению сенситизирующей активности основаны на способности веществ оказывать более выраженное действие на кожу при повторном воздействии. Реакция развивается на меньшие количества токсиканта и распространяется на области, непосредственно не контактировавшие с ним. В основе явления лежит иммунный механизм. Полагают, что в ходе первичного воздействия химическое вещество вступает во взаимодействие с белками кожи с образованием комплексного антигена; последний идентифицируется иммунной системой как чужеродный агент, на который вырабатываются антитела. Повторное воздействие токсиканта приводит к развитию аллергической реакции. Основным биологическим объектом, используемым в исследовании, являются морские свинки. Животные обрабатываются токсикантом в соответствующем растворителе. Контролем служит реакция животных на растворитель и известный сенситизирующий агент - 2,4-динитрохлорбензол в соответствующем растворителе. В периоде индукции не кожу морских свинок в течение 2х недель с интервалом 3 дня наносится токсикант. Затем, спустя 2 недели инкубационного периода, вещество апплицируется повторно (на 24 часа, по методике описанной выше). Выраженность эффекта оценивается на основании степени повреждения кожи и количества животных, у которых развилась положительная реакция на токсикант.

Модификации метода состоят в том, что в периоде индукции экспериментальному животному токсикант вводят внутрикожно совместно с адьювантом Фройнда (смесь веществ, усиливающих выработку антител), а разрешающую дозу наносят на поверхность кожи. Важно перед исследованием оценить непосредственное раздражающее (прижигающее) действие токсиканта, с тем, чтобы при оценке его сенситизирующих свойств использовать дозы, не вызывающие повреждения кожи.

Тесты на фототоксичность предназначены доля оценки способности веществ вызывать повреждение кожи при совместном действии со светом (преимущественно ультрафиолетовой части спектра). Разработаны специальные пробы на выявление как фототоксичности, так и фотосенситизирующего действия. В обоих случаях предполагается, что энергия света вызывает возбуждение молекулы токсиканта, которая, возвращаясь в нормальное энергетическое состояние, генерирует в коже реактивные, свободно-радикальные продукты. В случае фототоксичности, образовавшиеся радикалы непосредственно повреждают клетки ткани, при фотосенситизации они взаимодействуют с протеинами с образованием комплексных антигенов. Последние стимулируют выработку антител, что и приводит к аллергизации организма. Эти тесты являются модификациями, описанных выше тестов, по выявлению раздражающего и сенситизирующего действия, отличающимися тем, что обработанные исследуемым веществом участки кожи, подвергаются ультрафиолетовому облучению. Контролем являются животные, обработанные токсикантом, но не подвергшиеся облучению.

Недостатками методов являются: известный субъективизм при оценке эффектов и неопределенность, возникающая при аппроксимации данных, полученных на лабораторных животных, на человека.

ГЛАВА 7.3. ПУЛЬМОНОТОКСИЧНОСТЬ