Студопедия КАТЕГОРИИ: АвтоАвтоматизацияАрхитектураАстрономияАудитБиологияБухгалтерияВоенное делоГенетикаГеографияГеологияГосударствоДомЖурналистика и СМИИзобретательствоИностранные языкиИнформатикаИскусствоИсторияКомпьютерыКулинарияКультураЛексикологияЛитератураЛогикаМаркетингМатематикаМашиностроениеМедицинаМенеджментМеталлы и СваркаМеханикаМузыкаНаселениеОбразованиеОхрана безопасности жизниОхрана ТрудаПедагогикаПолитикаПравоПриборостроениеПрограммированиеПроизводствоПромышленностьПсихологияРадиоРегилияСвязьСоциологияСпортСтандартизацияСтроительствоТехнологииТорговляТуризмФизикаФизиологияФилософияФинансыХимияХозяйствоЦеннообразованиеЧерчениеЭкологияЭконометрикаЭкономикаЭлектроникаЮриспунденкция |
Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника.
Модульная единица 1.2
ЗАНЯТИЕ 1.2.1 Нормальная микрофлораорганизма человека. Дисбиозы Цель занятия: изучить доминантную и транзиторную микрофлору биотопов тела человека; функции нормальной микрофлоры, причины формирования дисбиозов.
Студент должен знать: 1. Качественный и количественный составнормальной микрофлоры организма человека, ее функции. 2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной микрофлоры организма человека. 3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии оценки. 4.Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция. 5. Развитие естественной микрофлоры у новорожденных и детей раннего возраста.
Студент должен уметь: · проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека; · проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры. Студент должен владеть: · методами микробиологических исследований биоматериала из различных биотопов организма человека
Работа № 1. Микрофлора кожи Цель:изучить микрофлору кожи. Самостоятельная работа:оценить результаты посевов с кожи рук методом отпечатков на МПА и средуЭндо. Зарисовать, описать. Сделать вывод. А) среда МПА Описать культуральные свойства колоний, выросших на МПА (наиболее типичные для данного посева). Результаты внести в таблицу. Из этих колоний приготовить мазки, окрасить по Граму. Зарисовать.
Препарат № 1 Препарат №2
Результат:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Б) среда Эндо - изучить посевы на среде Эндо с целью выявления кишечной палочки (lac+ колонии).Из лактозопозитивных колоний сделать мазки, окрасить по Граму. Отметить наличие или отсутствие фекального загрязнения.
Резултат:_____________________________________________________________________ __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Вывод:_______________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Работа № 2. Микрофлора ротовой полости Цель:изучить микрофлору зубного налета. Самостоятельная работа: приготовить препараты-мазки из зубного налета, окрасить по Граму и Бурри-Гинсу, оценить результат, сделать вывод. Ход исследования: а) стерильной палочкой взять материал из межзубного пространства; б) приготовить препарат-мазок; окрасить по Граму (препарат № 1); в) приготовить препарат-мазок, окрасить по Бурри-Гинсу(препарат № 2); г) микроскопировать; д) результаты внести в таблицу.
Вывод:_______________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Работа № 3. Микрофлора желудочно-кишечного тракта Цель:изучить микрофлору желудочно-кишечного тракта. Самостоятельная работа:оценить по готовым посевам и препаратам-мазкам результат исследования кала на дисбактериоз. Зарисовать, описать. По результаты микробиологического исследования кала рекомендовать препараты-пробиотики для коррекции дисбактериоза. Сделать вывод. Задача:В бактериологическую лабораторию доставили материал (кал) для исследования на дисбактериоз. Сделаны посевы на дифференциально-диагностические среды: Эндо, Калины, Блаурокка. а)описать культуральные свойства колоний.
Среда Блаурокка (для бифидумбактерий)
Результат: _____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________
Среда Эндо (ДДС для лак+ бактерий) Результат: _____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________
Среда Калины (для энтерококков)
Результат: ____________________________________________ ____________________________________________ ____________________________________________
Вывод:_______________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ б)по готовым мазкам, приготовленным из выросших колоний описать морфологическиеи тинкториальные свойства микроорганизмов. Окраска по Граму.
Результат: ______________________________________ _____________________________________ _____________________________________
Со среды Блаурокка
Результат: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
Сосреда Эндо
Результат: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
Со среды Калины Вывод:_______________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Результаты микробиологического исследования кала: ГБОУ ВПО ТюмГМА, Многопрофильная клиника Бактериологическая лаборатория Микробиологическое исследование фекалий на дисбактериоз (ост 91500. 11. 0004-2003)
№ пробы_____________ первичный, повторный (подчеркнуть) от «_____»_________________20_____г. Ф.И.О. пациента____Петров П.П.________________________________ возраст___24 года_____________________________________________ Диагноз______________________________________________________ Откуда направлен______________________________________________
Заключение: ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________
«____»_____________20____г. Врач _________________
Вывод:_______________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ в)объяснить назначение и механизм действия пробиотиков с учетом изменений качественного и количественного состава микрофлоры, классифицировать предложенные препараты. Результаты внести в таблицу:
Работа№ 4. Урогенитальная микрофлора Цель: изучить состав урогенитальной микрофлоры. Самостоятельная работа: по готовым препаратам-мазкам, окрашенным по Граму, оценить степень чистоты влагалищного секрета. Результаты внести в таблицу.
Вывод:_______________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Подпись преподавателя_______________________________________________________ Самостоятельная работа во внеурочное время Дать определение понятиям: 1.Постоянная(облигатная) микрофлора -_____________________________________________________________________ 2.Случайная (транзиторная) микрофлора -__________________________________________________________________ Микрофлора кожи Облигатная: _______________________________________________________________________ Транзиторная: _____________________________________________________________________ Методы санитарно-биологического исследования кожи: 1____________________________________________________________________________ 2____________________________________________________________________________ Микрофлора ротовой полости Облигатнаямикрофлора ротовой полости: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Транзиторная микрофлора ротовой полости: __________________________________________________________________________________________________________________________________________________________ Роль слюны в поддержании постоянствамикрофлоры _______________________________ _____________________________________________________________________________ Методы исследования микрофлоры ротовой полости 1.____________________________________________________________________________ 2.____________________________________________________________________________ Микрофлора ЖКТ Микрофлора желудка: __________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Микрофлора тонкого кишечника:_______________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Облигатная микрофлора толстого кишечника представлена:_________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Транзиторная микрофлора толстого кишечника представлена:_______________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Микрофлора уретры мужчин представлена:_______________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Микрофлора влагалища представлена: ___________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Пробиотики – это ______________________________________________________________ ____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ Подпись преподавателя_______________________________________________________ Теоретическая справка Микрофлора тела человека по происхождению подразделяется на постоянную(синонимы: доминантная, облигатная, основная, резидентная, индигенная, аутохтонная) и случайную (синонимы: ассоциативная, факультативная, дополнительная, транзиторная, аллохтонная). Постоянная микрофлора содержит представителей, специфичных для данного биотопа, а ассоциативная включает микроорганизмы, попавшие извне. Естественная микрофлора тела человека
К работе № 1 1. Кожа, особенно ее открытые части, обсеменены различными микробами. Так, во время проведения санитарно-гигиенических процедур с кожитела человека смывается от 85 до 120 млн. микроорганизмов. Микрофлора кожи складывается не только из микробов, находящихся на поверхности, но и в глубине кожи (волосяные мешочки, протоки сальных и потовых желез). На грязной коже многие микробы способны не только сохранять жизнеспособность, но и размножаться. На поверхности чистой кожи микроорганизмы быстро гибнут. Питание микробов кожи обеспечивается отмершими клетками эпителия, а также выделениями потовых и сальных желез. Через неповрежденные кожные покровы большинство микроорганизмов, в том числе и патогенные не проникают. При нарушении же целостности кожных покров, а также при снижении общей резистентности микроорганизмов на коже могут возникать различные заболевания: гнойничковые элементы, инфицированные мацерации, вызванные бактериями, грибками, вирусами. Микрофлору кожи составляют микроорганизмы как постоянно живущие на ней, так и разнообразная заносная микрофлора, попадающая из внешней среды - из воды, воздуха, почвы, при соприкосновении с грязными объектами внешней среды или полостями организма (рот, кишечник, полость носа и др.). На поверхности кожи обнаруживаются кокки (стафилококки, стрептококки), чаще непатогенные (сарцины, дифтероиды, бациллы, дрожжевые и дрожжеподобные грибы). Наиболее часто (80-90%) на коже определяется эпидермальный стафилококк –Staphylococcusepidermidis, - золотистый и лимонно-желтый стафилококк. Санитарно-бактериологическое исследование кожи проводится двумяметодами: 1) посев отпечатков кожи пальцев на чашки с МПА или на специальные среды (например, кровяной агар) с последующим макроскопическим и микроскопическим изучением выросших колоний; 2) смывы с рук, для проведения которых используют увлажненный ватный тампон, которым протирают руки обследуемого, начиная с менее загрязненных участков кожи: тыльную часть ладони, ладонь, межпальцевые поверхности, ногтевые ложа и подногтевые поверхности. Тампон погружают в стерильный физиологический раствор (8-10 мл), жидкость тщательно встряхивают и исследуют на ОМЧ и на наличие кишечной палочки. Определение общего микробного числа - ОМЧ. Методика.1 мл смыва вносят в стерильную чашку Петри, затем заливают ее 12 - 15 мл расплавленного и остуженного до 45°С МПА, перемешивают, после застывания агара посев инкубируют 24 - 48 часов, при температуре 37°С. Производят подсчет выросших колоний на поверхности чашки и в глубине агара при помощи лупы. Определение кишечной палочки. Методика.Оставшееся количество смыва помещают в пробирку с 5 мл среды Кесслера и инкубируют в термостате при температуре 43°С.На следующие сутки высеивают на среду Эндо. В случае появления типичных для кишечной палочки колоний производят идентификацию кишечной палочки и делают вывод о фекальном загрязнении кожи. Среда Кесслера содержит желчь, генциан фиолетовый, пептон, лактозу. E.coli ферментирует лактозу с образованием газа, скапливающегося в поплавке. К работе № 2 2. Микрофлора ротовой полости и верхних дыхательных путейразнообразна и многочисленна, здесь обнаруживается более 100 видов микроорганизмов. Особенно много их локализуется в зубном налете - в 1г сухой массы содержится около 250 млн. микробных клеток. В ротовой полости создаются благоприятные условия для жизнедеятельности микроорганизмов - это щелочная реакция слюны, пищевые остатки, термостатная температура и влажность. В различных участках полости рта микрофлора не одинакова. На боковых поверхностях рта микробов мало. Поверхность языка, особенно задней его части, а также задней части носоглотки содержит большое количество микроорганизмов. Здесь преобладают стрептококки, сарцины, спирохеты, веретенообразные палочки, стафилококки и др. Большое разнообразие микрофлоры наблюдается между зубами, в криптах и лакунах миндалин, где из остатков эпителия, детрита и бактерий образуются тонзиллярные пробки, однако преобладают стрептококки и диплококки. Резидентную группу составляют стрептококки (Str. salivarius и др.),непатогенные стафилококки, диплококки, коринебактерии, лактобациллы, вейлонеллы, трепонемы (Тг. buccalis - наиболее распространённый вид), дрожжеподобные грибы (Candidaalbicans), актиномицеты, микоплазмы, простейшие. Среди факультативных микроорганизмов встречаются энтеробактерии (роды Escherichia, Klebsiella, энтеробактерии протея), синегнойная палочка, спорообразующие - бациллы, клостридии, а также пептострептококки и пептококки. Некоторое время в ротовой полости могут персистировать вибрионы, спирохеты, дифтерийная палочка, менингококки и др. В поддержании количественного и качественного постоянства нормальной микрофлоры полости рта главную роль играет слюна, обладающая антибактериальной активностью за счёт содержания в ней ферментов (лизоцим, лактоферрин, пероксидаза, нуклеаза) и секреторных иммуноглобулинов. Индивидуальные колебания в составе микрофлоры полости рта зависят от возраста, гигиенических навыков, диеты, общей резистентности организма и резистентности слизистых оболочек, наличие дефектов зубов. Нормальная микрофлора полости рта обеспечивает её защиту за счёт конкуренции, антагонизма по отношению к патогенным микроорганизмам, таким как дифтерийный возбудитель, патогенные стафилококки и стрептококки, менингококки, условно-патогенные и патогенные грибы. В случае же нарушения микрофлоры, то есть возникновение дисбактериоза, патогенные и условно-патогенные микробы могут вызывать заболевания органов полости рта или обеспечивать так называемую нисходящую инфекцию, т.е. миграцию микроорганизмов из полости рта в глотку, гортань, желудок, трахею, бронхи, лёгкие. Для изучения микрофлоры ротовой полости применяют следующие методы: а) бактериологический – посев биоматериала на питательные среды с последующей идентификацией микроорганизмов; б) бактериоскопический (вспомогательный метод диагностики) - готовят препараты-мазки, красят по Граму, по Леффлеру и Нейссеру, Циль-Нильсену, Бурри-Гинсу, микроскопируют. Определяют морфологические и тинкториальные свойства возбудителей. К работе № 3 3. Микрофлора ЖКТ. Микрофлора желудка немногочисленна, здесь встречаются сарцины, кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии, дрожжевые грибы. Микрофлора тонкого кишечника также немногочисленна (благодаря действию ферментов), в этом биотопе обнаруживаются лактобактерии, дрожжевые и дрожжеподобные грибы. Микрофлора толстого кишечника: в толстом кишечнике находится самая разнообразная по составу микрофлора. Биомасса микроорганизмов, заселяющих кишечник взрослого человека, составляет 2,5-3 кг и включает в себя до 450 видов. Нормальная микрофлора кишечника на 92-95% состоит из строго анаэробных видов, остальная часть - аэробы. Микробиологическое исследование фекалий производится с целью определения состояния нормальной микрофлоры или для исключения дисбактериоза кишечника, показания для него разнообразны - предоперационное обследование больных, кишечные инфекции неясной этиологии, дисфункции кишечника после антибиотикотерапии, уточнение диагноза и др. Методика микробиологического исследования фекалий с целью определения нормальной микрофлоры и исключения дисбактериоза кишечника. Забор фекалий производится стерильной стеклянной палочкой в стерильную взвешенную посуду, забирают теплые нативные фекалии, доставляют в лабораторию не позднее чем через 2 часа. Исследуемые фекалии помещают в тиогликолевый буфер (способствующий сохранению как аэробный, так и анаэробной микрофлоры), затем готовят десятикратное разведение надосадочной жидкости в физиологическом растворе и высеивают на элективные и дифференциально-диагностические среды, соответственно группам выделяемых микроорганизмов, как аэробов, так и анаэробов. Посевы на факультативные анаэробы инкубируют в обычном термостате при 37°С. Из выросших подозрительных колоний выделяют чистую культуру микроорганизма, проводят полное изучение всех свойств (культуральных, морфологических, биохимических, патогенных и др.), идентифицируют до вида, подвида, типа. Идентификацию проводят как для выделенных патогенных и условно-патогенных возбудителей, так и представителей нормальной микрофлоры кишечника. Одновременно на чашках подсчитывают количество выросших колоний определённого рода, вида и производят определение микроорганизмов в 12 г фекалий, при подсчёте учитывают посевную дозу и разведения в буфере, из которых сделан высев. Количество обнаруженных микроорганизмов выражают в десятичных логарифмах. Полученные результаты сравнивают со справочными данными и делают заключение о состоянии микрофлоры кишечника.
Характеристика представителей нормальной микрофлоры кишечника человека: 1. Бифидобактерии (род Bifidobacterium). Строгие анаэробы. Занимают доминирующее положение в облигатной микрофлоре кишечника здорового человека, обладают высокой антагонистической активностью. Своё название получили из-за характерного разветвления на конце палочек - бифиркаций. Культивирование проводится на специальной питательной среде Блаурокка, в пробирках в анаэробных условиях. Среда Блаурокка готовится следующим образом - к печёночному отвару добавляют пептон, поваренную соль, мясопептонный агар, лактозу, солянокислый цистеин, среду стерилизуют и регенерируют кипячением в течение 40-45 минут. Культуральные свойства бифидобактерий. На среде Блаурокка, в толще среды, бифидобактерии дают характерный придонный рост - в виде "точек с хвостиками" или маленьких комочков. Морфологические свойства бифидобактерий.В мазке регистрируются характерные Гр+ палочки с разветвлёнными или утолщёнными концами, расположенные в виде римских пятёрок или скоплений, напоминающих китайские иероглифы. 2. Кишечные палочки(Escherichiacoli). Факультативные анаэробы. Прямые Гр- палочки с закругленными концами. ДДС - среда Эндо (питательный агар, 1% лактоза и индикатор – основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Свежеприготовленная среда бесцветна или имеет бледно-розовую окраску. При росте кишечной палочки (лактозоположительные бактерии) колонии окрашиваются в темно-красный цвет с металлическим блеском; лактозоотрицательные бактерии образуют бледно-розовые колонии. 3.Энтерококки (род Enterococcus). Аэробы. В настоящее время определяют 2 вида энтерококков - 1) Ent. fecalis и 2) Ent. faecium. Культивирование энтерококков проводится на среде Калины. Среда Калины - это ДДС для энтерококков, готовится на основе 1,5% ПМА, содержит глюкозу, дрожжевой гидролизат, молоко, полимиксин, краску кристаллический фиолетовый (водный раствор). На этой среде 2 вида энтерококков различаются по культурным свойствам - первый вид даёт колонии мелкие или средних размеров яркие, красно-вишнёвые, второй вид - розовые, розовато-серые колонии. Морфологические свойства энтерококков - в мазке видны короткие цепочки Гр+ кокков, иногда вытянутой формы или единичные кокки. К работе № 4 4. Микрофлора урогенитальной системы.Почки, мочеточники и моча в мочевом пузыре в норме стерильны. На наружных половых органах мужчин и женщин обнаруживаются микобактерии смегмы (Myсobaсteriumsmegmatis) непатогенные, иногда патогенные стафилококки, монококки, коринебактерии, микоплазмы, но пейзаж микроорганизмов однообразен, включает 2-3-4 вида. Уретра женщин обычно стерильна. Уретра мужчин имеет микрофлору немногочисленную - непатогенные кокки, сапрофиты, дрожжи.Микрофлора влагалища разнообразна, но не постоянна, зависит от многих причин, в том числе и от функции яичников, от возраста и общей резистентности организма, а также от уровня гликогена в клетках эпителия влагалища и рН влагалищного секрета. Сразу после рождения женщины происходит заселение влагалища лактобактериями, затем появляется кокковая флора. В зрелом возрасте, кроме лактобактерий и непатогенных кокков, появляются непатогенные стрептококки, клебсиеллы, бактероиды, анаэробы, микоплазмы, дрожжевые грибки, грибы Candida. Но основным и важнейшим представителем нормальной микрофлоры влагалища является Lас. vaginalis (палочки Додерлейна), влагалищные палочки. Влагалищные палочки имеют двоякую форму - одни из них крупные, грамположительные, с резко обрубленными концами, другие - тонкие, изящные, с заострёнными концами, располагаются поодиночке или попарно. Микроорганизмы неподвижны, спор не образуют, капсул не имеют, факультативные анаэробы. Наилучшей средой для культивирования является печёночный бульон с добавлением 2% виноградного сахара и кусочков печени или сахарный бульон, образуют S- и R- формы колоний. Обладают довольно выраженной биохимической активностью. В некоторых случаях, в микрофлоре влагалища появляются и вызывают заболевания такие микробы как патогенные или условно-патогенные стафилококки, стрептококки, синегнойные палочки, клебсиеллы, хламидии, а также микробные ассоциации. Хламидии, вызывающие распространённое в настоящее время хламидиоз, не являются представителем нормальной микрофлоры влагалища. Обнаружение хламидий в соскобе или мазке всегда говорит о патологическом процессе, даже в том случае, если у женщины нет клиники - в этом случае имеет место персистенция - до начала появления клинической болезни. Поражения органов урогенитального тракта, вызванные микоплазмами, хламидиями, клебсиеллами, сложны как в диагностике, так и в лечении. Трудности в диагностике вызваны особенностями строения и культивирования микроорганизмов - так, микоплазмы и хламидии размножаются внутриклеточно, а клебсиеллы имеют капсулу и требуют особых методов окраски. Микробиологическое изучение микрофлоры влагалища включает 2 метода исследования - микроскопическое и микробиологическое, с выделением чистой культуры возбудителей. Микроскопическое исследование состоит в определении степени чистоты влагалищного секрета (схема Гейрлина) в препарате-мазке или соскобе, взятым стерильным тампоном или специальным инструментом. Различают 4 степени чистоты влагалищного секрета при окраске по Граму: • при первой степени - обнаруживаются влагалищные палочки в чистой культуре и скудное количество клеток плоского эпителия; • при второй степени чистоты - кроме влагалищной палочки в мазке определяется небольшое количество посторонних бактерий (кокков и других непатогенных микроорганизмов) и клеток плоского эпителия; • третья степень чистоты характеризуется очень незначительным содержанием влагалищных палочек, значительным количеством кокковых форм, бактерий и обилием лейкоцитов; • при четвёртой степени частоты - влагалищные палочки совершенно отсутствуют, большое количество разнообразных кокков, палочковидные бактерии, грибы, микоплазмы, клебсиеллы, и др. Лейкоциты находятся в большом количестве. Микрофлору третьей и четвёртой степени чистоты следует рассматривать как дисбактериоз влагалища, но у женщин в климактерическом периоде или в пожилом возрасте она является распространённым явлением и не всегда рассматривается как патология. Во влагалищном содержимом при патологии могут быть обнаружены патогенные или условно-патогенные микроорганизмы - гонококки, стафилококки, хламидии, а также простейшие. Наиболее распространённым возбудителем из простейших является вагинальная трихомонада - Tr. vaginalis - жгутиковое простейшее длинной 5-30 мкм, имеет 3-5 жгутиков, вызывающая трихомонадныйкольпит. Для обнаружения этого возбудителя вагинальный секрет берут ватным тампоном или вагинальной ложечкой, помещают на подогретое предметное стекло, покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Вагинальная трихомонада обнаруживается и в окрашенных мазках - по Граму, по Романовскому-Гимза.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Последнее изменение этой страницы: 2018-04-12; просмотров: 190. stydopedya.ru не претендует на авторское право материалов, которые вылажены, но предоставляет бесплатный доступ к ним. В случае нарушения авторского права или персональных данных напишите сюда... |